促紅細胞生成素減輕新生兒窒息后血清誘導HK-2細胞凋亡作用的胞內(nèi)信號傳導機制研究.pdf

1、目的：研究促紅細胞生成素減輕新生兒窒息后血清誘導HK-2細胞凋亡作用的胞內(nèi)信號傳導機制。 方法：(1)以HK-2細胞(Human renal proximal tubular cell，人近曲腎小管上皮細胞)為研究對象。(2)以新生兒重度窒息(Apgar評分小于4分)后第一天血清(20％體積分數(shù))作為攻擊因素。(3)實驗分四組，即對照組、窒息組、EPO(erythropoietin，促紅細胞生成素)干預組、EPO+5-HD(5-

2、Hydroxydecanoic acid sodium salt，5-羥葵酸鹽)干預組。(4)檢測指標：倒置相差顯微鏡下觀察HK-2細胞生長情況；免疫組織化學方法檢測HK-2細胞胞漿內(nèi)Omi/HtrA2、Caspase-3、XIAP的表達情況；流式細胞儀檢測細胞凋亡率：激光共聚焦顯微鏡檢測HK-2細胞線粒體膜電位(△ψm)變化以及觀察間接免疫熒光雙染色Omi/HtrA2在細胞內(nèi)從線粒體向胞漿的轉位。(5)統(tǒng)計學分析：數(shù)據(jù)均用x±s表示，

3、采用one-way ANOVA分析，組間比較用LSD法。用SPSS13.0軟件進行處理。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。 結果：(1)倒置相差顯微鏡下觀察：對照組細胞貼壁良好，透明度大，折光性強，呈扁平的多角形，分裂相多，細胞排列緊密，連接成片，數(shù)量多；窒息組細胞生長緩慢，細胞數(shù)量比對照組明顯減少，細胞形態(tài)發(fā)生改變，由典型的扁平多角形細胞變?yōu)椴灰?guī)則圓形或橢圓形，折光性減弱，輪廓增強，胞質中出現(xiàn)空泡，脂滴，顆粒樣物質，細胞間空隙

4、加大，連接散，細胞間可見較多細胞碎片。EPO干預組較窒息組細胞損傷明顯得到改善；EPO+5-HD干預組細胞損傷狀況介于窒息組及EPO干預組之間，可看到細胞間連接不緊密，橢圓形及圓形細胞較多，透明度弱，折光性差。(2)與對照組(分別為22.75±4.03，32.13±5.46，34.88±4.39)相比，窒息組Omi/HtrA2(51.25±3.69)、caspase-3(62.88±4.70)表達明顯增加，XIAP(21.63±2.77

5、)表達明顯減少；而與窒息組比較，EPO組Omi/HtrA2(34.75±3.54)、caspase-3(47.38±5.18)表達明顯減少，XIAP(30.50±3.89)表達明顯增加；加入5-HD后，該作用可被抑制(分別為43.00±2.93，54.38±5.85，26.38±3.85)，差異具有統(tǒng)計學意義(P

6、O干預組(37.18±0.57)、EPO±5-HD干預組(40.75±0.70)細胞凋亡率明顯下降，但未恢復到對照組的水平，且EPO+5-HD干預組細胞凋亡率高于EPO干預組，組間差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(4)與對照組(2.84±0.11)相比，窒息組(0.97±0.08)細胞線粒體膜紅/綠熒光強度比值(590/530nm)明顯降低；但與窒息組相比，EPO干預組細胞線粒體膜紅/綠熒光強度比值(2.67±0.11)明顯升高；

7、EPO+5-HD干預組細胞線粒體膜紅/綠熒光強度比值(2.18±0.13)介于窒息組和EPO干預組之間，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(5)與對照組Omi/HtrA2細胞內(nèi)轉位率(％)(11.50±2.88)相比，窒息組Omi/HtrA2的細胞內(nèi)轉位率(％)(31.38±5.50)明顯增加；但與窒息組相比，EPO干預組Omi/HtrA2的細胞內(nèi)轉位率(％)(18.75±3.37)明顯減少；EPO±5-HD干預組Omi/HtrA2的細