抗人肝癌基因工程抗體嵌合IgG和嵌合Fab的構(gòu)建和表達.pdf_第1頁
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1、目的: 利用大腸桿菌高效表達肝癌相關(guān)抗原HAb18G胞外區(qū)片段,并分析其與相應(yīng)抗體的結(jié)合活性,進而明確表達產(chǎn)物用于鑒定和篩選基因工程抗體的可行性.設(shè)計引物分別克隆抗人肝癌單抗HAb18 Fd和輕鏈基因以及輕、重鏈可變區(qū)基因V<,H>和V<,L>,并構(gòu)建成Fab抗體的形式對其可靠性和準(zhǔn)確性進行驗證.之后,利用克隆的抗體基因構(gòu)建嵌合IgG抗體表達載體,轉(zhuǎn)染SP2/0細(xì)胞進行穩(wěn)定表達、純化和鑒定.將輕、重鏈可變區(qū)基因V<,L>和V<,H>先后

2、克隆入一個人鼠嵌合Fab抗體的通用載體,構(gòu)建成cFab的分泌性表達載體,在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達、純化和鑒定.同時分別構(gòu)建cFd和cL的原核非融合表達載體,誘導(dǎo)表達后,進行cFab復(fù)性的研究和產(chǎn)物鑒定.最終,對制備的三種基因工程抗體的抗原結(jié)合能力進行鑒定和初步比較. 結(jié)論:1.成功表達的HAb18G胞外區(qū)片段融合蛋白可以替代天然的HAb18G,以用做抗原來鑒定和篩選新型的基因工程抗體.2.成功克隆了HAb18Fd和輕鏈基因以及輕、重鏈可

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