雞大腸桿菌1型菌毛的抗原性分析及pilA基因表達載體構建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　本文首先根據(jù)雞源大腸桿菌1型菌毛結構基因pilA序列，在其保守區(qū)設計、合成了1對引物，經PCR擴增，從分屬20個血清型的26個致病菌株染色體中均得到大小為657bp的陽性產物，經酶切、連接、轉化，篩選所有菌株pilA基因陽性克隆，并分別測定其核酸序列。然后將上述分別帶有不同基因變異類型1型菌毛的雞大腸桿菌GL7(O78，1A)，YR10(O18，1B)及MG10(O11，1C)培養(yǎng)提取菌毛制成單價1型菌毛油乳劑疫苗及含O78、O18、

2、O11的多價1型菌毛滅活疫苗。觀察其變化。最后根據(jù)發(fā)表的雞大腸桿菌1型菌毛pilA基因序列，在其同源區(qū)設計合成了一對引物，經PCR擴增，分別從雞大腸桿菌GL7分離株(O78，1A)染色體擴增到大小約551 bp的DNA片段，用限制性內切酶SalⅠ和BamHⅠ同時酶切所擴增的外源基因片段和pET-32a(+)載體，經連接、轉化、篩選到重組質粒F15pilA/pET-32a(+)。再將此質粒轉化至宿主菌BL21(DE3)中，篩選獲得重組菌株

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