同型半胱氨酸致動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的 高同型半胱氨酸血癥(Hyperhomocysteinemia，HHcy)是近年確立的動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)的新的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，但其致病機(jī)制還不十分清楚。血管內(nèi)皮功能障礙是AS的始動(dòng)環(huán)節(jié)。同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)可通過破壞內(nèi)皮屏障、誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)亡、增加內(nèi)皮表面黏附因子的表達(dá)、抑制一氧化氮(Nitricoxide，NO)合成等損害內(nèi)皮功能，進(jìn)而導(dǎo)致AS的發(fā)生發(fā)展。氧化低密度脂蛋

2、白(Oxidizedlowdensitylipoprotein，oxLDL)在血管內(nèi)皮功能失調(diào)和AS中起著至關(guān)重要的作用。凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(Lectin-likelowdensitylipoproteinreceptor-1，LOX-1)是oxLDL在血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異受體，它的可誘導(dǎo)表達(dá)介導(dǎo)了oxLDL的多種致AS作用。葉酸與Hcy的代謝緊密聯(lián)系，葉酸的攝入缺乏導(dǎo)致HHcy。葉酸治療對(duì)內(nèi)皮功能也有改善作用，能降低心血管

3、疾病的風(fēng)險(xiǎn)。他汀類為3-羥3-甲基戊二酰輔酶A(3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzymeA，HMG-CoA)還原酶的特異性競(jìng)爭(zhēng)抑制劑，其包括改善內(nèi)皮功能在內(nèi)的非調(diào)脂作用所帶來的臨床益處遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出其本身的調(diào)脂作用。本研究試圖通過觀察Hcy與葉酸、氟伐他汀對(duì)HUVECsLOX-1表達(dá)的影響來深入探討Hcy致AS的可能分子機(jī)制。 方法 應(yīng)用不同濃度(0μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100

4、μmol/L、200μmol/L、500μmol/L)Hcy孵育培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)24小時(shí)后，或分別應(yīng)用各濃度的葉酸(50μmol/L、100μmol/L)和氟伐他汀(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)與Hcy(100μmol/L)共同孵育HUVECs24小時(shí)后，利用半定量的逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Semi-quantitati

5、vereversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR)的方法檢測(cè)HUVECs上LOX-1的mRNA表達(dá)水平的改變。 結(jié)果 (1)空白對(duì)照組的LOX-1mRNA表達(dá)微弱。生理劑量的Hcy組(10μmol/L組)與空白對(duì)照組相比上調(diào)HUVEC的LOX-1mRNA表達(dá)，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。超生理劑量的Hcy組(50-500μmol/L各組)與空白對(duì)照組比較，也能上調(diào)HUVECs的

6、LOX-1mRNA表達(dá)，但其中只有100μmol/L組與空白對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各超生理劑量Hcy組對(duì)HUVECs的LOX-1mRNA表達(dá)和生理劑量Hcy組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各組超生理濃度的Hcy組間比較，其HUVECs的LOX-1mRNA水平亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)單純?nèi)~酸干預(yù)組與空白對(duì)照組比較，HUVECs的LOX-1mRNA表達(dá)量增加，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Hcy與葉酸共同培養(yǎng)組和單純Hcy培養(yǎng)組相比，HUVE

7、CsLOX-1mRNA的表達(dá)量降低，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Hcy與葉酸共同培養(yǎng)組和空白對(duì)照組相比，HUVECs的LOX-1mRNA水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)和空白對(duì)照組比較，各不同濃度的單純氟伐他汀培養(yǎng)組上調(diào)HUVECs的LOX-1mRNA表達(dá)，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。不同濃度氟伐他汀與Hcy(100μmol/L)共同培養(yǎng)組與單純Hcy培養(yǎng)組相比，降低HUVECs的LOX-1mRNA表達(dá)水平，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同濃度氟伐他汀和Hcy(100

8、μmol/L)共同培養(yǎng)組與空白對(duì)照組比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 結(jié)論 (1)同型半胱氨酸能夠上調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞LOX-1mRNA的表達(dá)，證實(shí)同型半胱氨酸可能以LOX-1為中介在動(dòng)脈粥樣硬化中發(fā)揮作用；(2)葉酸具有下調(diào)同型半胱氨酸誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞LOX-1mRNA表達(dá)增加的趨勢(shì)，提示葉酸可能通過拮抗同型半胱氨酸發(fā)揮其內(nèi)皮細(xì)胞功能的改善作用；(3)氟伐他汀具有下調(diào)同型半胱氨酸誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞LOX-1mRNA表達(dá)增加的趨