熱休克蛋白70在炎性牙髓組織中的免疫組化表達(dá)及意義.pdf

1、[目的]：采用“二步法”免疫組化法研究鼠牙髓在程度不同的機(jī)械性鉆磨損傷刺激(淺磨、深磨、穿髓)后以及人牙髓在不同程度的齲源性因素刺激(淺齲、深齲、急、慢性牙髓炎)后HSP70的免疫定位；探討在外界刺激因素不同的情況下HSP70在鼠及人的牙髓中是否有相同的動(dòng)態(tài)表達(dá)；推測(cè)在牙髓受到外界刺激過(guò)程中HSP70所起的修復(fù)和應(yīng)激保護(hù)能力。 [方法]： 一、選取wistar大鼠，雄性，24只，體重200～280克左右，根據(jù)不同的處理時(shí)

2、間將24只大鼠隨機(jī)分為6組，每組4只，即正常組、淺磨24h組、深磨24h組、穿髓24h組、穿髓3d組和穿髓7d組。麻醉后仰臥固定，用備好的高速渦淪鉆分別在大鼠左右上頜第一磨牙合面進(jìn)行機(jī)械性鉆磨(淺磨組磨除釉質(zhì)0.3mm，深磨組磨除釉質(zhì)牙本質(zhì)厚度0.7mm，穿髓組深度不宜超過(guò)1mm，并用探針刺探見(jiàn)出血點(diǎn)即可)。各組鼠分別按規(guī)定時(shí)間脫頸處死，迅速將左右側(cè)上頜第一磨牙及周圍牙槽骨的組織塊放入10％福爾馬林溶液(PH7.4)，4℃固定，脫鈣、脫

3、水、石蠟包埋。各標(biāo)本作5um厚的石蠟切片，分別進(jìn)行HE染色和免疫組化染色后，光鏡觀察并進(jìn)行圖象分析。 二、應(yīng)用HSP70鼠抗人單克隆抗體，分別對(duì)10例健康牙髓、淺齲患牙牙髓、深齲患牙牙髓、急性牙髓炎和慢性牙髓炎5組牙髓進(jìn)行HE染色和免疫組化染色，(所有標(biāo)本取臨床因阻生或正畸拔除的健康第三磨牙或前磨牙的牙髓和確診存在炎癥的第三磨牙牙髓)對(duì)HSP70進(jìn)行免疫定位和分析。 [結(jié)果]：在對(duì)大鼠磨牙機(jī)械性鉆磨損傷過(guò)程中，淺磨24h

4、組和對(duì)照組HSP70在牙髓組織中只有個(gè)別標(biāo)本可見(jiàn)弱陽(yáng)性著色，與后四組相比(P＜0.01)。深磨24h組可見(jiàn)成牙本質(zhì)細(xì)胞成纖維細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)，血管內(nèi)皮細(xì)胞弱陽(yáng)性表達(dá)。穿髓24h組和3d組表現(xiàn)為急性炎癥反應(yīng)，HSP70在成牙本質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞中均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，成纖維細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)。至穿髓7d時(shí)為弱陽(yáng)性表達(dá)，可能為修復(fù)期所致。 人牙髓標(biāo)本結(jié)果顯示①人牙髓在齲源性刺激(淺齲、深齲、急慢性牙髓炎)后同正常組牙髓相比其HE染色

5、可觀察到淺齲組變化不大，個(gè)別標(biāo)本可見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。其它組可觀察到成牙本質(zhì)細(xì)胞排列紊亂，牙髓的炎細(xì)胞浸潤(rùn)伴毛細(xì)血管擴(kuò)張，有時(shí)可見(jiàn)修復(fù)性牙本質(zhì)的形成和牙髓壞死的組織病理變化。②免疫組化染色可見(jiàn)HSP70在健康牙髓和淺齲牙髓中只有個(gè)別標(biāo)本弱陽(yáng)性表達(dá)，深齲組可見(jiàn)成牙本質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)。血管內(nèi)皮細(xì)胞弱陽(yáng)性表達(dá)。急性牙髓炎組牙髓細(xì)胞均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，其中可見(jiàn)中性粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)顯著。慢性牙髓炎組亦呈陽(yáng)性染色，但染色程度不一致，總體偏弱。