Raf激酶抑制蛋白在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、背景：鼻咽癌是我國(guó)南方及東南亞地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一，早期轉(zhuǎn)移是鼻咽癌最重要的特征之一，也是患者治療失敗的主要原因，但鼻咽癌轉(zhuǎn)移機(jī)制尚不清楚。Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是一種高度保守、廣泛表達(dá)、具有多種生理與病理功能的蛋白質(zhì)，近年來(lái)的研究表明，RKIP具有抑制前列腺癌和乳腺癌轉(zhuǎn)移的作用，可能是一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。 方法：采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分離、鑒定鼻咽癌組織與鼻咽正常粘膜組織的差異表達(dá)蛋白質(zhì)。以差異蛋白質(zhì)RKIP為研

2、究對(duì)象，采用Western blot檢測(cè)RKIP在不同轉(zhuǎn)移潛能的鼻咽癌細(xì)胞5-8F(高轉(zhuǎn)移)和6.10B(不轉(zhuǎn)移)細(xì)胞中的表達(dá)水平，采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)RKIP在鼻咽正常粘膜組織、鼻咽癌組織和頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中的表達(dá)水平；采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將正義、反義RKIP核酸表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-ssRKIP和peDNA3.1(-)-asRKIP及其相應(yīng)空白載體pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)分別轉(zhuǎn)染5-8F和6-10B細(xì)

3、胞，建立相應(yīng)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。以穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系為樣本，Transwell小室侵襲遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RKIP表達(dá)水平改變對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的侵襲遷移能力的影響：MTT、流式細(xì)胞儀和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RKIP表達(dá)水平改變對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期分布和停泊非依賴性生長(zhǎng)的影響。 結(jié)果： (1)建立了鼻咽癌組織和鼻咽正常粘膜組織的2-DE圖譜，識(shí)別了31個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，質(zhì)譜鑒定了19個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)，其中RKIP等蛋白質(zhì)在鼻咽癌組

4、織中下調(diào)； (2)RKIP在高轉(zhuǎn)移5-8F細(xì)胞系中的表達(dá)水平低于無(wú)轉(zhuǎn)移潛能的6-10B細(xì)胞，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移鼻咽癌組織中的表達(dá)水平低于原發(fā)鼻咽癌組織； (3)建立了RKIP表達(dá)上調(diào)的5-8F細(xì)胞系和RKIP表達(dá)下調(diào)的6-10B細(xì)胞系； (4)上調(diào)RKIP在5-8F細(xì)胞中的表達(dá)水平能明顯降低其侵襲遷移能力，下調(diào)RKIP在6-10B細(xì)胞中的表達(dá)水平能明顯增強(qiáng)其侵襲遷移能力； (5)上調(diào)RKIP在5-8F細(xì)胞中的表