鴨疫里氏桿菌溫州分離株的分離、PCR檢測(cè)及基因分型研究.pdf

1、鴨疫里氏桿菌(Riemerella anatipestifer,RA)為革蘭氏陰性短桿菌,無(wú)芽孢,不運(yùn)動(dòng),是引起鴨敗血癥的病原,同時(shí)也可以感染家鴨、火雞及多種其他鳥類。呈急性或慢性經(jīng)過(guò),主要病理特征為纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎。由于本病的高死亡率、致鴨體重減輕和高淘汰率,使其成為養(yǎng)鴨業(yè)經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的疾病之一。其高致病率和高死亡率被認(rèn)為是集約化肉鴨養(yǎng)殖的一個(gè)主要問(wèn)題。因此,建立RA的快速檢測(cè)和基因分型方法具有重要的意義。
　　

2、 本試驗(yàn)從浙江省溫州地區(qū)某鴨場(chǎng)送檢疑似鴨疫里氏桿菌病死鴨的腦、心包液、脾及肝中分離到WZ1和WZ2兩株細(xì)菌,這兩株細(xì)菌進(jìn)行組織病理學(xué)觀察、菌落形態(tài)觀察、染色鏡檢、生化鑒定及動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn),證實(shí)分離的兩株細(xì)菌為鴨疫里氏桿菌。兩株細(xì)菌對(duì)新霉素、頭孢孟多、氟嗪酸及壯觀霉素等抗生素敏感。
　　 本研究根據(jù)GenBank中26株鴨疫里氏桿菌的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,在其高度保守區(qū)設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物,成功建立了鴨疫里氏桿菌的快速P

3、CR檢測(cè)方法并對(duì)18株RA菌株進(jìn)行擴(kuò)增,結(jié)果所有的鴨疫里氏桿菌均能擴(kuò)增出767bp的特異性目的條帶,而鴨源大腸桿菌、鴨源多殺性巴氏桿菌和鴨源沙門氏菌均為陰性。PCR產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序鑒定證實(shí)為RA。最低檢出基因組DNA為1Pg。該方法能從病料組織培養(yǎng)4小時(shí)的混合物中快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)到RA,提示該方法可用于RA的快速診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
　　 建立了一種針對(duì)RA的Rep-PCR基因分型方法,以提純的RA基因組或者全菌體基因組為模板,進(jìn)行R

4、ep-PCR擴(kuò)增。根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖譜,將18株RA區(qū)分為8個(gè)不同的基因型,不同血清型的RA圖譜有明顯差異,相同血清型RA的圖譜也存在差異。RA基因組中重復(fù)的基因外回文結(jié)構(gòu)可用于區(qū)別相同血清型的不同分離株。提示Rep-PCR作為一種實(shí)用的基因分型方法,在流行病學(xué)研究中可對(duì)RA分離株進(jìn)行基因分型。
　　 總之,本研究所建立的針對(duì)RA的PCR檢測(cè)方法及Rep-PCR分子分型方法,為在養(yǎng)鴨業(yè)中預(yù)防控制鴨疫里氏桿菌病提供了一