柑橘體細胞融合創(chuàng)制三倍體無核新種質及融合再生植株的遺傳鑒定.pdf

1、柑橘在我國農業(yè)經濟上具有重要地位，柑橘的優(yōu)質豐產是其在國際柑橘市場上的核心競爭力。無核一直是柑橘育種追求的目標性狀。細胞融合技術，為柑橘無核育種提供了一條快捷的途徑，即通過融合單倍體(n)原生質體與二倍體(2n)原生質體獲得三倍體?；谶@一思路，本研究利用‘早金’甜橙單倍體愈傷系與其它6個二倍體有核柑橘品種的葉肉或愈傷親本融合，旨在獲得綜合雙親優(yōu)點的三倍體新種質。另外，本研究采用SSR分子標記對實驗室前期獲得的一批融合再生植株進行了倍性

2、和遺傳分析。主要研究結果如下:
　　1.單倍體愈傷原生質體+二倍體葉肉原生質體融合創(chuàng)制三倍體。以‘早金’甜橙單倍體愈傷系Fa為親本，分別與6個二倍體種間良種的葉肉原生質體融合。各組合融合產物在后期培養(yǎng)過程中均逐漸死亡，經多次（每個組合至少3次）嘗試都未再生成功，表明單倍體愈傷原生質體與二倍體葉肉原生質體融合較難再生。
　　2.單倍體愈傷原生質體+二倍體愈傷原生質體融合創(chuàng)制三倍體。分別以‘早金’甜橙單倍體愈傷系Fa、Ec為親本

3、，與‘默科特’橘橙(MCK)愈傷組織原生質體融合，得到Fa+MCK組合的再生愈傷組織，倍性測定為二倍體與四倍體的混倍體，得到Ec+ MCK組合的再生愈傷組織、胚狀體，倍性測定為五倍體。
　　3.3個組合融合產物的再生與倍性分析。本研究對實驗室前期留下的G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabori’甜橙、G1+‘默科特’橘橙三個組合的融合產物進行后續(xù)培養(yǎng)，最終分別成功獲得G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabori’甜橙、G1+‘默科特

4、’橘橙再生植株31株、14株、4株。經流式細胞儀倍性檢測，3個組合的所有再生植株均為四倍體。
　　4.3個組合再生植株的遺傳鑒定。采用SSR分子標記，分別對G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabori’甜橙、G1+‘默科特’橘橙3個組合的再生植株進行胞質基因組、核基因組的遺傳來源鑒定，結果表明:3個組合的再生植株都為四倍體體細胞雜種，其核基因組來源于兩方親本，同時可能發(fā)生了一定程度的重組交換，G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabor