不同糖濃度培養(yǎng)對人肝細胞LO2鐵代謝相關蛋白的影響.pdf

1、鐵作為人體必需的微量元素，廣泛參與體內(nèi)的代謝過程。鐵缺乏和鐵過量對機體都將產(chǎn)生不良影響。肝臟是機體主要的鐵貯存部位，同時在鐵穩(wěn)態(tài)的調節(jié)中起著中心和樞紐作用，鐵調素等許多重要的鐵代謝相關蛋白都是肝臟特異性合成分泌的。細胞鐵穩(wěn)態(tài)主要通過IRE/IRP系統(tǒng)調節(jié)，機體鐵穩(wěn)態(tài)主要通過一種阻止鐵進入血液的激素hepcidin調控。
　　 相關臨床資料和流行病學調查中發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)糖尿病組的血清鐵水平比對照組高，糖尿病隨病情發(fā)展常伴有鐵蓄積加重。

2、體外實驗顯示，用20mmol/L濃度葡萄糖處理小鼠胰島組織，其H-鐵蛋白mRNA比1mmol/L濃度的要高出4-8倍。在鏈脲霉素誘導的糖尿病大鼠腎臟中，TfR表達增加。另有實驗表明，高糖可以刺激細胞產(chǎn)生過量ROS。過多的ROS除了直接發(fā)揮細胞毒性作用外，還能夠通過細胞信號傳導系統(tǒng)調控鐵代謝相關蛋白表達。
　　 越來越多的證據(jù)揭示，鐵代謝和糖代謝之間存在相互影響，二者的關系可能是雙向的，即鐵代謝異?？梢杂绊懱谴x；而長期高血糖又可

3、損傷鐵代謝通路。但確切的機制尚未完全闡明。
　　 目的:
　　 利用體外培養(yǎng)正常人肝細胞LO2，設定不同葡萄糖濃度培養(yǎng)環(huán)境，觀察不同濃度葡萄糖對細胞鐵代謝調控相關蛋白表達的影響，為探討糖代謝與鐵代謝的關系提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 一、不同糖濃度培養(yǎng)對LO2細胞ROS、MDA水平和鐵代謝相關蛋白表達的影響
　　 細胞分組：LO2細胞(購自中科院上海細胞庫)，分為5.5mmol/L組，15m

4、mol/L組和25 mmol/L組。培養(yǎng)基為DMEM，加2％新生牛血清和青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml，葡萄糖濃度分別為5.5mmol/L，15mmol/L和25 mmol/L，培養(yǎng)時間分別為0h，12h，24h和48h。
　　 指標測定：用熒光染色法檢測細胞ROS水平；用TBA法檢測細胞MDA水平；用蛋白免疫印跡法檢測鐵調節(jié)蛋白1(IRP1)、轉鐵蛋白受體1(TfR1)、轉鐵蛋白受體2(TfR2)、鐵調素(hep

5、cidin)蛋白表達量。
　　 二、過氧化氫對LO2細胞ROS、MDA水平和鐵代謝相關蛋白表達的影響
　　 細胞分組：LO2細胞用終濃度為100μmol/L過氧化氫處理，對照組只加入等量的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基為DMEM，加2％新生牛血清和青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml，葡萄糖濃度為5.5mmol/L。培養(yǎng)時間為60mik。
　　 指標測定：用熒光染色法檢測細胞ROS水平；用TBA法檢測細胞MDA水平；用蛋

6、白免疫印跡法檢測鐵調節(jié)蛋白1(IRP1)、轉鐵蛋白受體1(TfR1)、轉鐵蛋白受體2(TfR2)、鐵調素(hepcidin)蛋白表達量。
　　 三、Vit.E對不同糖濃度培養(yǎng)LO2細胞ROS、MDA水平和鐵代謝相關蛋白表達的影響
　　 細胞分組：LO2細胞分為5.5mmol/L組，15mmol/L組和25 mmol/L葡萄糖組培養(yǎng)，各濃度葡萄糖組又分為C.1mg/L、1mg/L和10mg/L的Vit.E處理組，各濃度葡萄

7、糖對照組只加入等量相應葡萄糖濃度培養(yǎng)基。培養(yǎng)基為DMEM，加2％新生牛血清和青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml，葡萄糖濃度分別為5.5mmol/L，15mmol/L和25mmol/L，培養(yǎng)時間為24h。
　　 指標測定：用熒光染色法檢測細胞ROS水平；用TBA法檢測細胞MDA水平；用蛋白免疫印跡法檢測鐵調節(jié)蛋白1(IRP1)、轉鐵蛋白受體1(TfR1)、轉鐵蛋白受體2(TfR2)、鐵調素(hepcidin)蛋白表達量。

8、
　　 各組實驗的圖象分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計：采用Quantity One圖像分析系統(tǒng)進行分析，實驗數(shù)據(jù)用(X±S)表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理應用統(tǒng)計軟件SPSS13.0，統(tǒng)計方法采用方差分析。
　　 結論:
　　 本研究設定5mmol/L、15mmol/L和25mmol/L三個葡萄糖濃度培養(yǎng)環(huán)境，觀察在不同濃度葡萄糖條件下體外培養(yǎng)的正常人肝細胞LO2鐵代謝調控相關蛋白表達變化。結果發(fā)現(xiàn)：
　　 1.LO2細胞ROS和M

9、DA水平隨培養(yǎng)基中葡萄糖濃度的升高和培養(yǎng)時間延長而升高。
　　 2.LO2細胞IRP1、TfR1、TfR2隨培養(yǎng)基中葡萄糖濃度的升高而升高。
　　 3.在細胞培養(yǎng)基中添加過氧化氫可直接誘導LO2細胞IRP1、TfR1、TfR2表達顯著升高。
　　 4.Vit.E能夠降低高糖培養(yǎng)細胞活性氧的含量，緩解IRP1、TfR1、TfR2蛋白表達增加的幅度。
　　 5.hepcidin在高糖培養(yǎng)下表達升高，而在過氧化