重組腺病毒介導E2F-shRNA轉移抑制人視網膜母細胞腫瘤生長的實驗研究.pdf

1、研究目的：觀察腺病毒(Adenovirus，Ad)介導E2F—shRNA轉移對人視網膜母細胞瘤(Retlnoblastoma，RB)眼前房移植瘤生長的抑制作用。 研究方法：利用脂質體介導編碼E2F—shRNA的表達質粒體外瞬時轉染腫瘤細胞，48小時后Realtime RT—PcR檢測E2F1表達情況，PI（碘化丙酊)染色檢測細胞周期各時相細胞數量及DNA含量；體內實驗按50moi的劑量分別用Ad_E2F—shRNA(治療組)、A

2、d-E2F-x(x為非治療基因序列，對照組)體外感染表達綠色熒光蛋白(GFP)的人視網膜母細胞瘤細胞，48小時后收集細胞、計數，在手術顯微鏡下分別將2*105經上述感染的人視網膜母細胞瘤細胞注射到裸鼠左、右兩側眼前房內。術后5d起采用熒光體視鏡連續(xù)觀察雙側眼內腫瘤生長情況并拍攝照片，連續(xù)觀察兩周；待鏡下腫瘤充滿眼內前房，處死動物，取眼球及腦組織做石蠟包埋，病理切片眼球進行HE染色，觀察雙側腫瘤組織在正常眼組織中所占的面積。 研究

3、結果：編碼E2F—shRNA的表達質粒瞬時轉染腫瘤細胞48小時后，Realtlrne RT—PcR篩選到1個能在轉錄水平明顯抑制靶基因hE2F1表達的sh—RNA序列；瞬時轉染腫瘤細胞48小時后PI（碘化丙酊)染色檢測到轉染了hE2F1siRNA的細胞中s期細胞數明顯減少；熒光體視鏡下連續(xù)觀察雙側眼前房內腫瘤生長情況存在明顯差異；眼球組織HE染色示雙側腫瘤組織所占正常眼的比例存在差異，對照組腫瘤組織面積較大。 研究結論：能有效抑