冠狀動脈微栓塞致心肌細胞凋亡及其線粒體途徑激活的研究.pdf

1、目的：探討大鼠冠狀動脈微栓塞后心肌細胞凋亡及其線粒體途徑激活的動態(tài)變化規(guī)律。 方法：夾閉主動脈，經(jīng)左心室心尖部注射42μm的微栓塞球3000個(3000個/O.1m1)，建立大鼠冠狀動脈微栓塞模型。首先按微栓塞后不同觀察時間點分為3h組、6h組、12h組、24h組、4w組；其次在各時間點觀察組中設置微栓塞組、假手術組。注入微栓塞球后存活者為微栓塞組(CME組，n=10)，左心室心尖部注入0.1ml生理鹽水者為假手術組(S組，n=

2、10)，另選取10只未經(jīng)任何處理的大鼠作為正常對照組。采用末端脫氧核糖核酸轉移酶介導的dLJTP切口末端標記技術(TUNEL)檢測心肌細胞凋亡，應用Western blot檢測心肌細胞中凋亡線粒體途徑主要調節(jié)蛋白Caspase-9的表達，同時采用熒光檢測試劑盒檢測Caspase-9的活性。 結果：與正常對照組、S組比較，CME3h組、6h組、12h組、24h組、4w組大鼠LVEF均顯著降低(均P<0.05)；與S組比較，CME組

3、各時間點的心肌細胞凋亡指數(shù)均顯著升高(均P<0.05)，CME組各時間點中，以6h組的凋亡指數(shù)最高(P<0.05)，12h組開始下降，4w組時已顯著降低；CME3h組、6h組、12h組、24h組、4w組心肌細胞凋亡指數(shù)和大鼠LNEF呈顯著負相關(3h組：r=-0.780，P=0.036；6h組：r=O.862，P=0.013：12h組：r=-0.811,P=0.040;24h組:r=-0.803,P=0.042;4w組:r=-0.675

4、,P=0.040)；Western blot結果顯示線粒體凋亡途徑關鍵蛋白Caspase-9的表達在6h組達高峰(P<0.05)，12h組開始下降，以后逐漸減少；Caspase-9的活性測定表明，與S組比較，CME3h組、6h組、12h組、24h組、4w組Caspase-9的活性均顯著增加(均P<0.05)，‘CME組各時間點中，以6h組心肌細胞中Caspase-9的活性程度最高；CME組各時間點之間的微梗死面積比較均無顯著差異(均P>