去甲斑蝥素抑制人乳腺癌SKBR3細胞增殖及侵襲轉移的體外研究.pdf

1、研究背景與目的：乳腺癌的復發(fā)和轉移是乳腺癌患者死亡的重要原因，也是臨床治療的難題。腫瘤轉移是一個嚴格有序的過程，趨化因子在腫瘤發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，包括控制白細胞浸潤至腫瘤、調節(jié)腫瘤相關血管生成、激活宿主對腫瘤的特異性免疫應答、以自分泌或旁分泌方式刺激腫瘤細胞增殖、控制腫瘤細胞運動等。CXCR4在人類乳腺癌細胞，惡性乳腺腫瘤及遠處轉移灶均高度表達，與SDF-1(CXCL12)相互作用嚴格調控腫瘤細胞的侵襲、運動及與血管內皮的黏附能力

2、等。Ras基因在細胞生長、增殖的調控中起重要作用，參與信號傳導通路、細胞周期檢控、細胞增殖分化調節(jié)和凋亡的抑制。乳腺癌中，Ras家族H-ras、Rhoc GTPase基因水平與腫瘤的增殖、侵襲和轉移有密切關系。阻斷或下調CxCR4與ras信號傳導通路均是有效的抗腫瘤治療策略，也是抗腫瘤藥物研發(fā)熱點。 外科手術是治療大多惡性腫瘤首選方法，但對于已轉移，易復發(fā)或晚期癌癥，藥物治療(化療)通常是抵御和預防惡性腫瘤的有力武器。但化療伴隨

3、的毒副作用對患者的生活質量產生不可忽視的影響，因而當前臨床治療的方向就是那些有選擇性地抑制腫瘤細胞而對人體正常細胞沒有毒性或低毒性，對機體免疫反應影響小的抗腫瘤藥物。中醫(yī)中藥治療腫瘤為我國的特色，具有獨特的機制與效應，去甲斑蝥素(Norcantharidin，NCTD)具有傳統(tǒng)中藥斑蝥素顯著的抗癌活性，可在細胞毒、誘導凋亡、抗粘附轉移、抑制腫瘤血管生成等多個環(huán)節(jié)發(fā)揮抗癌作用。對肝癌等多種腫瘤細胞的生長有抑制作用，且心腎毒、副作用較低，并

4、有刺激骨髓造血系統(tǒng)使白細胞升高，調節(jié)機體免疫功能，具有廣闊的應用前景。去甲斑蝥素可抑制乳腺癌細胞增殖，但是否能抑制乳腺癌侵襲、轉移的研究國內外尚未見報道，其抗癌機制是否與其它腫瘤一致；NCTD是否也能通過CXCR4和/或H-ras信號傳導途徑影響乳腺癌細胞生長增殖和侵襲轉移作用，尚需進一步研究探討。本課題主要探討去甲斑蝥素對乳腺癌細胞增殖，細胞外基質的粘附和侵襲轉移過程的影響，揭示去甲斑蝥素抑制乳腺癌細胞侵襲轉移的機制，為該藥在臨床乳腺

5、癌侵襲轉移的防治提供藥理方面理論。 方法：體外培養(yǎng)人乳腺癌SKBR3細胞株，采用MTT法檢測NCTD對乳腺癌細胞SKBR3生長增殖的抑制能力；流式細胞術測NCTD對SKBR3細胞周期和凋亡的影響；應用腫瘤細胞體外粘附實驗、遷移實驗和Transwell體外侵襲轉移模型檢測NCTD對SKBR3細胞粘附、運動、侵襲轉移的抑制作用。通過RT-PCR、流式細胞術、westem-blot等方法研究乳腺癌細胞CXCR4、H-ras增殖和表達，

6、揭示NCTD對腫瘤細胞的體外生長和運動遷移能力影響的分子機制。 結果：NCTD可抑制人乳腺癌SJBR3細胞增殖生長，24h的IC<,50>為12.5μg/mL。呈明顯的劑量和時間依賴性；NCTD 10μg/mL作用SKBR3細胞24h、48h后，特異地使SKBR3細胞發(fā)生G<,2>/M期阻滯，G<,2>/M期細胞百分比分別為35.82﹪、38.7﹪，G<,1>期和S期細胞較對照組明顯減少，亞G<,1>和G<,0>峰DNA含量逐漸

7、增加，24h、48h的凋亡率分別為3.44﹪和116.17﹪；SKBR3細胞的體外粘附、運動、侵襲轉移能力隨NCTD藥物濃度提高而下降，表現在細胞形態(tài)改變，粘附抑制率增加，過河時間延長，過膜細胞數減少(P<0.05)。RT-PCR、流式細胞術,western-blot結果顯示，10μg/mL NCTD作用SKBR3后，H-ras mRNA和ras P21蛋白水平表達明顯下降，且48h組遠低于24h和對照組(P<0.05)；而藥物組CXC

8、R4 mRNA及蛋白水平則有表達上調趨勢，24h升高，48h又趨下降，與對照組相比，差別無顯著性意義(P>0.05)。 結論： 1.證實去甲斑蝥素有效抑制乳腺癌SKBR3細胞的增殖，阻滯細胞周期，誘導凋亡發(fā)生。 2.證實去甲斑蝥素有效抑制乳腺癌SKBR3細胞與細胞外基質成分粘附，侵襲和轉移。 3．證實去甲斑蝥素可通過下調H-ras基因的表達而抑制乳腺癌細胞增殖、侵襲、轉移。為拓展去甲斑蝥素成為臨床抗乳腺癌