活血解毒中藥干預動脈粥樣硬化易損斑塊的作用及機理研究.pdf

1、目前,動脈粥樣硬化(AS)易損斑塊在導致急性心血管事件方面的重要性已受廣泛重視。改善易損斑塊內(nèi)部成分,使其趨于穩(wěn)定,成為防治急性心血管事件的重要內(nèi)容。隨著“AS炎癥反應”學說的公認,為中醫(yī)產(chǎn)生新的冠心病病機學說、更新治療觀念提供了良好契機。我們在既往動物實驗研究的基礎上,提出“活血解毒——抑制炎癥反應——穩(wěn)定斑塊”的假說,并從基礎研究和臨床試驗兩個方面展開研究。
　　 1.基礎研究:活血解毒中藥對ApoE基因敲除(ApoE-/-

2、)小鼠斑塊穩(wěn)定性的影響及機制探討。
　　 目的:觀察活血(三七總皂苷)、解毒(黃連提取物)、活血解毒(虎杖提取物、大黃醇提物)中藥有效部位對ApoE-/-小鼠主動脈粥樣斑塊穩(wěn)定性的影響,并從抑制炎癥反應、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和改善膠原沉積及代謝三個角度探討其作用機制。
　　 方法:70只ApoE-/-,小鼠經(jīng)“西方膳食”飼料喂養(yǎng)13周后,隨機取4只小鼠觀察基礎AS病變水平。其余小鼠隨機分為6組:虎杖提取物組、大黃醇提物組、黃連提

3、取物組、三七總皂苷組、辛伐他汀組、模型組各11只,并以同品系C57BL/6J小鼠10只作為正常對照。繼續(xù)高脂喂養(yǎng)并按體重比折算的臨床推薦劑量給予相應藥物治療13周后,處死取主動脈根部的4個切面,分別行HE染色、Movat染色、苦味酸天狼星紅染色以及免疫組織化學染色法觀察斑塊內(nèi)部成分,同時取血清用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測炎性相關指標,實時熒光定量PCR法檢測小鼠主動脈內(nèi)相關基因表達,觀察并計算:1)主動脈斑塊形態(tài)變化:包括斑塊面積

4、,細胞外脂質(zhì)、泡沫細胞、膠原成分各自占斑塊面積的百分比以及斑塊內(nèi)脂質(zhì)成分與膠原成分比值,埋藏纖維帽數(shù)目以及纖維帽占斑塊表層比值,并結合免疫組化染色半定量觀察斑塊內(nèi)平滑肌細胞的陽性面積,最后采用易損指數(shù)綜合評價藥物對小鼠主動脈斑塊穩(wěn)定性的影響；2)血脂改變及對脂質(zhì)代謝相關基因周脂素和清道夫受體CD36的基因表達影響；3)炎性指標:血清超敏C反應蛋白(hs-CRP)和可溶性白細胞分化抗原配體(sCD40L)水平、斑塊內(nèi)粒細胞-巨噬細胞集落細

5、胞刺激因子(GM-CSF)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)的表達、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPAR-γ)和核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)的基因表達；4)膠原的合成代謝:Ⅰ、Ⅲ型膠原的組成、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)及組織金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP-1)的表達。
　　 結果:(1)無論是在改善斑塊易損指數(shù)方面,還是在修復斑塊纖維帽的能力方面,活血解毒中藥虎杖提取物及大黃醇提物組,均優(yōu)于單純活血中藥三七總皂苷和單純解毒中藥

6、黃連提取物組。綜合評價藥物穩(wěn)定斑塊的作用,上述藥物表現(xiàn)出的趨勢是活血解毒中藥>清熱解毒中藥>活血化瘀中藥；(2)虎杖提取物和大黃醇提物還可明顯降低ApoE-/-小鼠血清炎癥標志物hsCRP及sCD40L水平,優(yōu)于活血對照藥三七總皂苷和解毒對照藥黃連提取物,這與穩(wěn)定斑塊的作用相平行。各中藥組對斑塊內(nèi)炎性因子GM-CSF表達均有一定抑制作用,大黃醇提物還可明顯抑制TNF-α表達,而黃連提取物組則明顯促進斑塊內(nèi)PPAR-γmRNA和蛋白表達；

7、(3)各中藥組可不同程度調(diào)節(jié)ApoE-/-小鼠血清脂蛋白水平,減少斑塊內(nèi)細胞外脂質(zhì)成分,其中大黃醇提物、黃連提取物還可明顯抑制斑塊內(nèi)perilipin mRNA表達,但各中藥組清道夫受體CD36的基因表達無顯著影響；(4)各中藥組均可明顯增加斑塊內(nèi)膠原纖維成分,降低Ⅲ/Ⅰ型膠原比值,其中虎杖提取物、三七總皂苷、黃連提取物組MMP-9/TIMP-1比值亦明顯降低。
　　 結論:活血、解毒及活血解毒中藥有效部位三七總皂苷、黃連提取物

8、、虎杖提取物、大黃醇提物在臨床推薦劑量上均可通過改善斑塊內(nèi)部成分發(fā)揮穩(wěn)定易損斑塊的作用,但其作用環(huán)節(jié)有所差異。其中,兼有活血和解毒作用的中藥虎杖提取物、大黃醇提物效果最為顯著。其機制可能與抑制炎癥反應、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和改善膠原沉積及代謝有關,尤以抑制炎癥反應為最主要機制,驗證了“活血解毒——抑制炎癥反應——穩(wěn)定斑塊”的假說。
　　 2.臨床研究:活血解毒中藥對冠心病穩(wěn)定期患者血清炎癥標記物的影響。
　　 目的:以新清寧片(

9、熟大黃)為活血解毒中藥的代表藥物、以丹七片為活血對照藥,觀察在常規(guī)他汀類藥物治療基礎上加用新清寧或丹七片對冠心病穩(wěn)定期患者血清炎癥標志物的影響。
　　 方法:將30例冠心病穩(wěn)定期患者隨機分為三組:他汀對照組,予他汀類降脂藥常規(guī)治療；活血中藥治療組,在他汀類藥物常規(guī)治療基礎上加用丹七片,每次三片(0.3g/片),每天3次；活血解毒中藥治療組,在他汀類藥物常規(guī)治療基礎上加用新清寧片,每次三片(0.3g/片),每天3次。每組10例。治

10、療1個月后,觀察患者治療前后血清hs-CRP、TNF-α、MMP-9和CD40L濃度變化,血脂水平,心絞痛癥狀和血瘀證積分變化。
　　 結果:無論是降低冠心病患者血清hs-CRP濃度、調(diào)節(jié)血脂還是降低患者心絞痛癥狀和血瘀證積分方面,活血解毒中藥治療組(他汀藥常規(guī)治療加用新清寧片)均表現(xiàn)出良好作用,優(yōu)于他汀藥對照組及活血中藥治療組(他汀藥常規(guī)治療加丹七片)。但各組對血清TNF-α、MMP-9和CD40L水平影響無顯著差異。