犬瘟熱病毒H基因克隆測(cè)序與原核表達(dá).pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩63頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶(hù)提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、將犬瘟熱病毒弱毒株接種Vero細(xì)胞觀察細(xì)胞病變,將細(xì)胞反復(fù)凍融三次收獲病毒,并對(duì)病毒增殖純化。根據(jù)GenBank中已發(fā)表犬瘟熱病毒Onderstepoort弱毒株的附著或血凝蛋白基因序列,設(shè)計(jì)合成了一對(duì)能擴(kuò)增1074bp基因片段的引物,引物兩端有Sal Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位點(diǎn)。以病毒RNA為模板,用RT-PCR方法,擴(kuò)增出1074bp H基因。將擴(kuò)增得到的部分H基因克隆到pMD18-T載體上,經(jīng)藍(lán)白斑和酶切鑒定篩選出陽(yáng)性克隆進(jìn)行序列測(cè)定

2、,用blast工具將其與GeneBank上標(biāo)準(zhǔn)株代表毒株序列進(jìn)行了比較。結(jié)果表明:該基因與標(biāo)準(zhǔn)株代表毒株序列完全同源,同時(shí)與疫苗株Onderstepoort、Convac 株和國(guó)內(nèi)外CDV病毒分離株進(jìn)行了序列分析和同源性比較。結(jié)果顯示目前使用的CDV弱毒疫苗株H基因的核苷酸和編碼氨基酸與國(guó)內(nèi)和日本犬瘟熱病毒分離株同源性比較低,與揚(yáng)州分離株同源性為90.6%,長(zhǎng)春分離株為91.3%,新疆分離株為90.5%,日本分離株D85755為91%;

3、與Onderstepoort、Convac株、美國(guó)分離株98-2666-2同源性較高,分別為97.7%、97.2%、98.1%,與國(guó)內(nèi)、日本分離株存在明顯的差異。上述結(jié)果表明,CDV在傳代過(guò)程中由于受生態(tài)環(huán)境、不同動(dòng)物之間互相傳播等因素的影響,引起了野毒株的變異,CDV疫苗株不能對(duì)所有的CDV流行株產(chǎn)生有效的保護(hù)。 對(duì)克隆載體pTH做Sal Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切,將所得片段以正確閱讀框架插入pET-32a(+)載體,構(gòu)建了重組質(zhì)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶(hù)所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶(hù)上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶(hù)上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶(hù)因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論