沙眼衣原體質(zhì)粒致病機制分析.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩57頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、第一部分沙眼衣原體質(zhì)粒編碼蛋白的表達和相互作用的分析
  目的:分析沙眼衣原體質(zhì)粒編碼蛋白的相互作用。
  方法:采用基因克隆的方法將沙眼衣原體質(zhì)?;騊gp1-4及Pgp8分別克隆到pRAC和pRBR上,通過轉(zhuǎn)錄激活細菌雙雜交系統(tǒng)分析蛋白相互作用。
  結(jié)果:Western blot結(jié)果顯示Pgp1、Pgp3與大腸桿菌RpoA氨基末端功能區(qū)(α-NTD)融合蛋白及 Pgp1、Pgp3、Pgp4與 DNA結(jié)合蛋白λCI

2、融合蛋白,能在大腸桿菌中表達。在報告菌株中,共表達與α-NTD融合的Pgp3蛋白(α- Pgp3)及與λCI融合的Pgp3蛋白(CI-Pgp3),導致報告基因產(chǎn)物β-半乳糖苷酶的活性升高。而余無明顯變化。
  結(jié)論:Pgp3編碼的Pgp3能與自身相互作用。
  第二部分沙眼衣原體質(zhì)粒編碼蛋白Pgp3和Pgp4致病作用分析
  目的:探究沙眼衣原體質(zhì)粒編碼蛋白Pgp3及Pgp4的致病作用。
  方法:用轉(zhuǎn)化菌株L2

3、GFP△Pgp3、L2GFP△Pgp4、L2GFP和野生菌株L2及不含質(zhì)粒菌株L2建立HeLa229細胞感染模型,分別對各菌株進行經(jīng)菌落PCR驗證,Titration測定IFUs繪制生長曲線,激光共聚焦觀察不同感染時間點包涵體形態(tài),Western Blotting檢測主要外膜蛋白(MOMP)表達量,糖原定量試劑盒測定HeLa細胞糖原含量,SEAP Quanti-Blue檢測TLR2和NF-κB信號通路的激活情況。
  結(jié)果:菌落P

4、CR驗證各菌株均正確;衣原體表型分析結(jié)果顯示:質(zhì)粒及其編碼蛋白Pgp4不影響衣原體繁殖(P>0.05),但缺失突變后可使包涵體內(nèi)容物在感染早期提前釋放,感染后期內(nèi)容物減少從而影響包涵體形態(tài);Western blotting、糖原定量、SEAP Quanti-Blue結(jié)果顯示:與野生菌株相比,L2GFP△Pgp4 MOMP的表達量較高(P<0.001),糖原累積能力及激活TLR2及NF-κB信號通路能力較弱(P<0.001)。與Pgp4相

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論