乳腺癌前哨淋巴結微轉(zhuǎn)移術中診斷技術的初步研究.pdf

1、背景與目的：免疫磁珠技術是近年來國內(nèi)外研究的一種新的免疫學技術,由于具有高特異性、高濃縮性、高分離率,且不影響細胞活性等特點,與常規(guī)檢測技術(如RT-PCR、流式細胞儀等)相結合,彌補了常規(guī)檢測技術的不足,改善了這些檢測方法對腫瘤細胞檢測的敏感性及特異性。免疫磁珠分離在循環(huán)腫瘤細胞檢測中的應用價值已得到了肯定,但其用于乳腺癌前哨淋巴結活檢(SLNB)術中診斷國內(nèi)外尚未見報道。
　　 本課題應用免疫磁珠分離技術對早期乳腺癌患者前哨

2、淋巴結活檢所得到的前哨淋巴結(SLN)行術中診斷,與傳統(tǒng)的術中冰凍HE染色及細胞角蛋白免疫組化(CK-IHC)法相比,評價其敏感性、特異性、假陰性率等指標,旨在建立一個新的分子學診斷模型,為當前乳腺癌前哨淋巴結轉(zhuǎn)移的術中診斷方法提供新的思路。
　　 研究方法:2009年1月至2009年9月天津市腫瘤醫(yī)院連續(xù)收治的62例女性乳腺癌病人。所有病人均符合2009年NCCN推薦的前哨淋巴結活檢的條件,于術中以美藍法行前哨淋巴結活檢術。每

3、個病人所得的SLN標記后,將每個前哨淋巴結平均分為A、B、C、D四部分。將對角線的A、D部分行moc-31單抗免疫磁珠分離聯(lián)合流式細胞分析乳腺癌轉(zhuǎn)移相關標志物CD44v6、her-2、Mucin-1表達水平,從而診斷SLN的轉(zhuǎn)移情況。而同一淋巴結的B、D兩部分各取兩張切片行傳統(tǒng)的前哨淋巴結術中冰凍HE染色和抗CK7及CKAE1/AE3細胞角蛋白免疫組化技術(CK-IHC)診斷SLN的轉(zhuǎn)移情況。比較三種術中診斷方法對前哨淋巴結活檢的敏感性

4、、特異性、假陰性率等指標,并進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：
　　 1.前哨淋巴結檢出情況:成功確定了62例中52例的SLN,成功率83.9％。52例確定SLN的病例,共檢出SLN89枚。在52例成功實施SLNB的病人均行全腋窩淋巴結清掃術,共檢出腋窩非SLN914枚,每例9-51枚,平均為17.6枚,中位淋巴結數(shù)18枚。其中25例病人腋窩淋巴結有轉(zhuǎn)移,共取得陽性淋巴結120枚。
　　 2.乳腺癌前哨淋巴結的HE染

5、色:89枚SLN冰凍切片發(fā)現(xiàn)17例病人24枚SLN發(fā)生轉(zhuǎn)移。在25例腋窩淋巴結陽性病人中,術中SLN冰凍切片組8例病人SLN陰性,而伴非SLN的淋巴結轉(zhuǎn)移,假陰性率為32％(8/25)。SLN術中冰凍HE染色的敏感性為6896(17/25),特異性為100％(17/17)。
　　 3.抗CK7和CKAE1/AE3細胞角蛋白免疫組化:52例病人取得的89枚SLN中通過抗CK7和CKAE1/AE3細胞角蛋白免疫組化,其中19例病人2

6、8枚SLN診斷為轉(zhuǎn)移。運用細胞角蛋白免疫組化染色診斷乳腺癌前哨淋巴結轉(zhuǎn)移敏感性為76.0％(19/25),特異性為100.0％(19/19),假陰性率為24％(6/25)。
　　 4.免疫磁珠分離診斷前哨淋巴結轉(zhuǎn)移:聯(lián)合免疫磁珠分離與流式細胞分析,發(fā)現(xiàn)24例病人39枚SLN發(fā)生轉(zhuǎn)移。在免疫磁珠分離組,1例SLN陰性,而伴非SLN得淋巴結轉(zhuǎn)移,假陰性率為4.0％(1/25)。免疫磁珠分離法用于SLNB的敏感性為96％(24/25)

7、,特異性為96.3％(26/27)。
　　 結論：
　　 1.本實驗引入免疫磁性分離技術術中診斷前哨淋巴結轉(zhuǎn)移,與傳統(tǒng)的冰凍HE染色及CK-IHC相比,證實免疫磁珠分離能夠快速、準確地判斷出SLN陽性細胞,為下一步指導手術奠定了堅實的基礎。
　　 2.對乳腺癌前哨淋巴結行傳統(tǒng)的冰凍HE染色發(fā)現(xiàn),在前哨淋巴結的術中診斷方面,傳統(tǒng)的冰凍HE染色在臨床上廣泛應用的同時卻仍有敏感性低,假陰性率較高等不足。
　　

8、3.本實驗對乳腺癌前哨淋巴結行抗CK7和CKAE1/AE3細胞角蛋白免疫組化染色,其敏感性及假陰性率等指標較冰凍切片HE染色法具有明顯的優(yōu)勢。在冰凍HE染色的基礎上聯(lián)合CK-IHC分析可以有效的提高SLN檢測的靈敏度及微轉(zhuǎn)移的檢出率,但由于CK-IHC時間較長,故實用性較差。
　　 4.免疫磁珠分離技術較冰凍切片和細胞角蛋白免疫組化技術在乳腺癌前哨淋巴結活檢中,在敏感性和假陰性率等指標上具有明顯的優(yōu)勢,其結果的穩(wěn)定性有待更大樣本