枳椇子水提取物抗疲勞耐寒耐熱耐缺氧作用的實(shí)驗(yàn)研究和制劑制備.pdf

1、疲勞是一種復(fù)雜的生理現(xiàn)象，可引起官兵作業(yè)作戰(zhàn)能力減退，可導(dǎo)致一般人群工作效率降低、差錯(cuò)事故增多。疲勞產(chǎn)生后，若不能及時(shí)恢復(fù)，就可能造成亞健康狀態(tài)；不斷累積，可能引發(fā)“過(guò)度訓(xùn)練綜合征”、“慢性疲勞綜合征”等，使機(jī)體內(nèi)分泌紊亂、免疫力下降，甚至出現(xiàn)器質(zhì)性病變，威脅人類健康。服用增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)耐力，促進(jìn)疲勞恢復(fù)的藥物，是抗疲勞的有效措施之一。寒冷、高溫都會(huì)影響體內(nèi)代謝，是影響部隊(duì)?wèi)?zhàn)斗力的惡劣環(huán)境因素，嚴(yán)重的還會(huì)導(dǎo)致心臟及大腦供氧不足而死亡。缺氧是指

2、機(jī)體生命活動(dòng)所需的氧不能得到充足的供給，可誘發(fā)機(jī)體各系統(tǒng)功能改變，威脅人體健康。因此延緩疲勞的發(fā)生和耐寒耐熱耐缺氧的藥物一直是軍事醫(yī)學(xué)及運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)等學(xué)科的研究重點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)藥材枳棋子(Semen Hoveniae)進(jìn)行提取，研究枳棋子水提取物(Hoveniadulcis Thunb extract HTE)增加機(jī)體耐寒耐熱耐缺氧及抗疲勞作用，并測(cè)定其所含的總黃酮及槲皮素含量，為研發(fā)具有耐寒耐熱耐缺氧抗疲勞功效的軍用特需藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3、 本實(shí)驗(yàn)用純凈水對(duì)枳棋子藥材進(jìn)行提取，并經(jīng)醇沉。雄性昆明小鼠隨機(jī)分為：空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(諾迪康膠囊280mg/kg)及低、中、高(50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)3個(gè)劑量給藥組。連續(xù)給藥后，采用高溫刺激、寒冷刺激、常壓缺氧、亞硝酸鈉中毒缺氧、急性腦缺血缺氧及減壓缺氧，爬竿、爬網(wǎng)、游泳等模型考察枳椇子水提取物對(duì)動(dòng)物耐寒耐熱耐缺氧抗疲勞能力的影響。檢測(cè)小鼠耐力運(yùn)動(dòng)時(shí)間；取肝臟及肌肉檢測(cè)糖原含量，考察枳

4、棋子水提取物對(duì)小鼠糖原儲(chǔ)備量的影響；耐力實(shí)驗(yàn)后檢測(cè)機(jī)體生化指標(biāo)的變化情況。用H2O2刺激PC12細(xì)胞使其發(fā)生凋亡，MTT法檢測(cè)PC12細(xì)胞相對(duì)活力，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。采用比色法，以蘆丁為對(duì)照品，測(cè)定提取物中的總黃酮含量。制備枳棋子水提物片劑，采用HPLC法對(duì)提取物片劑的槲皮素含量進(jìn)行測(cè)定。 耐寒耐熱實(shí)驗(yàn)證明，枳椇子水提取物高劑量組顯著延長(zhǎng)小鼠在寒冷、高溫條件下的存活時(shí)間。缺氧實(shí)驗(yàn)中枳椇子水提取物延長(zhǎng)小鼠常壓缺氧、亞硝酸鈉

5、中毒缺氧、急性腦缺血缺氧等條件下的存活時(shí)間，并且能夠抵抗因減壓缺氧造成的機(jī)體生化指標(biāo)的改變。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，枳椇子水提取物顯著提高H2O2損傷PC12細(xì)胞存活率，降低細(xì)胞凋亡及死亡比率?？蛊趯?shí)驗(yàn)中，枳棋子水提取物能夠延長(zhǎng)小鼠爬桿、爬網(wǎng)、游泳時(shí)間，并且增加機(jī)體糖原儲(chǔ)備。在長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)后，動(dòng)物體內(nèi)血紅蛋白含量，乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶總抗氧化能力均降低，丙二醛含量增加。枳椇子水提取物能夠顯著逆轉(zhuǎn)上述生化指標(biāo)的改變，增加動(dòng)

6、物體內(nèi)血紅蛋白含量，提高乳酸脫氫酶，超氧化物歧化酶，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性，增強(qiáng)總抗氧化能力，減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛的生成。枳棋子水提取物抵抗H2O2引起的PC12細(xì)胞凋亡，降低細(xì)胞凋亡率。枳椇子水提取物能夠以片劑的形式制劑，可以HPLC法測(cè)定槲皮素含量作為枳椇子片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定法。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，枳椇子水提取物具有耐寒耐熱耐缺氧抗疲勞的功效。其作用機(jī)制可能與其提高乳酸脫氫酶，超氧化物歧化酶，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶等抗氧化酶的