SD大鼠脊髓損傷前后外周血和損傷局部T淋巴細(xì)胞亞群的變化.pdf

1、研究背景：傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為CNS損傷后的自身免疫反應(yīng)會(huì)加重繼發(fā)性損害不利于神神經(jīng)再生。近年來(lái)，以色列研究小組提出“保護(hù)性自身免疫”學(xué)說(shuō)，即CNS損傷后的自身免疫反應(yīng)同時(shí)具有神經(jīng)保護(hù)和促進(jìn)神經(jīng)再生的積極作用。我們認(rèn)為導(dǎo)致學(xué)術(shù)界爭(zhēng)論不休的原因：SCI后外周血和損傷局部的T淋巴細(xì)胞可能存在不同的功能亞群，有的亞群具有神經(jīng)保護(hù)性潛能，而另外的則可能具有神經(jīng)損害潛能， SCI后功能恢復(fù)的最終結(jié)果可能要決定于這些不同細(xì)胞亞群之間的平衡。
　　目

2、的：檢測(cè)SD大鼠脊髓損傷前及損傷后不同時(shí)間外周血及損傷局部T淋巴細(xì)胞亞群的變化，并對(duì)這些細(xì)胞亞群的變化及功能作用和機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法：1.用紐約大學(xué)脊髓撞擊儀，SD大鼠制備中等程度撞擊損傷的脊髓損傷動(dòng)物模型并評(píng)估其效果。
　　2.用流式細(xì)胞儀、CD3-FITC、CD8-PE、CD4-PE、CD25-Percp、FOXP3-APC檢測(cè)SCI前后外周血CD3、CD4T、CD8T細(xì)胞亞群和Treg細(xì)胞亞群。
　　3

3、.用密度梯度離心方法分離新鮮脊髓局部浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SCI前后CD3CD8陽(yáng)性、CD3CD4陽(yáng)性和Treg細(xì)胞亞群。
　　4.采用CD4和FoxP3雙色免疫熒光標(biāo)記抗體，檢測(cè)SCI前后局部浸潤(rùn)的CD4陽(yáng)性細(xì)胞和Treg細(xì)胞。
　　結(jié)果：
　　1.用紐約大學(xué)脊髓撞擊儀10g*25mm撞擊SD大鼠的T9脊髓致SD大鼠雙下肢肌力活動(dòng)喪失，造成截癱。病理觀察有顯著差異，中等程度撞擊損傷的脊髓損傷動(dòng)物模型成功制備

4、。
　　2.SCI前后不同時(shí)間點(diǎn)SD大鼠外周血CD3+CD8+/CD3+，Treg/CD4+比例無(wú)明顯化，無(wú)顯著性差異（p>0.05）。SCI后1、3、5天，1周的CD3+T細(xì)胞，CD3+CD4+T細(xì)胞比例，以及 CD3+CD4+/ CD3+CD8+比值明顯低于 SCI前有顯著性差異（p<0.05）。在SCI后2周，上述各T細(xì)胞亞群的比例均恢復(fù)到術(shù)前水平，兩時(shí)間點(diǎn)之間比較無(wú)顯著性差異（p>0.05）。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)

5、正常SD大鼠脊髓局部檢測(cè)不出CD3陽(yáng)性T細(xì)胞，損傷后檢測(cè)到浸潤(rùn)的CD3陽(yáng)性細(xì)胞，其中局部CD4陽(yáng)性T細(xì)胞術(shù)后第3天分別與術(shù)后第1、3周之間有顯著差異(p<0.05)，脊髓損傷局部CD4陽(yáng)性T細(xì)胞術(shù)后第1周與術(shù)后第3周之間有顯著差異(p<0.05)，CD8陽(yáng)性T細(xì)胞的比例在術(shù)后第3天分別與術(shù)后第1、3周之間有顯著差異(p<0.05)，Treg的比例在術(shù)后第2周較高分別與第3天、第1周、第3周之間有顯著差異性(P<0.05)。
　　4

6、.采用組織免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)正常SD大鼠脊髓檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)CD4+，Treg細(xì)胞，局部 CD4細(xì)胞數(shù)量除了 SCI術(shù)后1周與術(shù)后第2周、第3周之間比較無(wú)差異(p>0.05)，余各個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩兩之間有顯著性差異(p<0.05)，局部Treg細(xì)胞數(shù)量除了SCI術(shù)后1周與術(shù)后3周之間比較無(wú)差異外(p>0.05)，余各個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩兩之間有顯著性差異(p<0.05)，局部Treg/CD4比值SCI后第1天和2周兩個(gè)高峰之間無(wú)差異p>0.05，SCI后3

7、天，1周，3周之間無(wú)差異(p>0.05)，余各個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩兩之間有顯著性差異(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.用紐約大學(xué)脊髓撞擊儀制備 SD大鼠的中等程度撞擊損傷的脊髓損傷動(dòng)物模型是較理想可靠的方法。
　　2. SD大鼠SCI手術(shù)后外周血中主要是CD3淋巴細(xì)胞、CD3+CD4+淋巴細(xì)胞的比例及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值下降。SD大鼠SCI手術(shù)后外周血中CD3+CD8+淋巴細(xì)胞的比例及Treg/CD3+C

8、D4+淋巴細(xì)胞的比例無(wú)明顯變化。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)正常SD大鼠脊髓檢測(cè)不出活化的T細(xì)胞，與損傷后出現(xiàn)T淋巴細(xì)胞相比有顯著差異。相對(duì)外周血而言，損傷局部浸潤(rùn)的T細(xì)胞主要 CD3CD4細(xì)胞為主，比例上升，CD3CD8細(xì)胞比例下降，Treg細(xì)胞/CD3CD4細(xì)胞比例下降。
　　4.采用組織免疫熒光染色技術(shù)分析正常SD大鼠脊髓未檢測(cè)到CD4T及Treg細(xì)胞，損傷后CD4T、Treg細(xì)胞、Treg/CD4上升明顯，有顯著差異性。