缺氧后處理影響肺泡Ⅱ型上皮細胞死亡受體途徑凋亡機制的研究.pdf

1、目的：探討缺氧后處理影響肺泡Ⅱ型上皮細胞死亡受體途徑凋亡的機制，為研究急性肺損傷保護措施提供新的實驗依據(jù)。
　　 方法：將傳3代的人肺泡Ⅱ型上皮細胞系(A549細胞)隨機分成3組，每組6個標本，分別為常氧(Normoxia)組、缺氧復氧(H/R)組和缺氧后處理(H-PostC)組。①Normoxia組(37℃，5％CO2，95％air)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h；②H/R組缺氧(37℃，5％CO2，95％N2)12h后再復氧(37℃，

2、5％CO2，95％air)12h；③H-PostC組缺氧(37℃，5％CO2，95％N2)12h后給予重復三次的5min復氧/5min缺氧的后處理，繼以恢復氧供(5％CO2，95％air)12h。實驗前后在倒置相差顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)學改變；利用流式細胞儀檢測各組A549細胞的凋亡率；RT-PCR檢測caspase8、Fas和FasL基因的表達量。
　　 結果：①細胞形態(tài)學變化：Normoxia組：可見細胞成梭型，胞體明亮呈

3、完整，緊貼瓶底，無懸浮細胞；H/R組：細胞胞體變圓、變暗，在培養(yǎng)上清液中可見大量漂浮的細胞碎片，并可見大量的空泡狀細胞；H-PostC組：少部分細胞胞體變圓，細胞間隙稍增寬，有少量的懸浮的細胞碎片。②細胞凋亡率(％)：三組間檢測指標比較，差異均有顯著性(p<0.05)；與Normoxia組比較，H/R組和H-PostC組明顯升高(p<0.05)；而H-PostC組則明顯低于H/R組(p<0.05)。③caspase8基因的表達：三組間比

4、較，差異均有顯著性(p<0.05)；與Normoxia組比較，H/R組和H-PostC組明顯升高(p<0.05)；而H-PostC組則明顯低于H/R組(p<0.05)。④Fas基因的表達：三組間比較，差異均有顯著性(p<0.05)；與Normoxia組比較，H/R組和H-PostC組明顯升高(p<0.05)；而H-PostC組則明顯低于H/R組(p<0.05)。⑤FasL基因的表達：三組間比較，差異均顯著(p<0.05)，與Normox