肌醇六磷酸對人結(jié)腸癌細胞系HT-29生物學行為的影響.pdf

1、目的：用肌醇六磷酸(Inosito.Hexaphosphate，IP6)作用于人結(jié)腸癌細胞系HT-29不同時間，觀察IP6作用不同時間對HT-29細胞生物學行為的影響并對其作用機制進行探討。 方法：將3.3mmol/L的IP6作用于HT-29細胞不同時間(3d、6m、12m)，以未經(jīng)IP6作用的HT-29細胞作為對照，通過裸鼠體內(nèi)接種致瘤的方法觀察IP6對HT-29細胞致瘤性的影響；將3.3mmol/L的IP6作用于HT-29細

2、胞不同時間(3d、6m、12m)，以未經(jīng)IP6作用的HT-29細胞作為對照，應用雙層軟瓊脂培養(yǎng)測定細胞克隆形成率的變化；分光光度法測定細胞內(nèi)腸型堿性磷酸酶(IAP)和細胞培養(yǎng)液內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)活性的改變；RT-PCR法檢測細胞內(nèi)bcl-2、c-My.mRNA的表達變化；免疫細胞化學法檢測細胞內(nèi)增殖細胞核抗原(PCNA)及細胞色素c(Cyt-c)表達的改變。 結(jié)果：裸鼠體內(nèi)移植瘤實驗結(jié)果顯示，IP6作用組HT-29細胞裸鼠體

3、內(nèi)移植瘤的成瘤時間較對照組長，成瘤率較對照組低，最終形成腫瘤的體積也明顯小于對照組，而且這些作用都表現(xiàn)出明顯的時間依賴性。雙層軟瓊脂培養(yǎng)結(jié)果表明，經(jīng)IP6作用的HT-29細胞的集落形成能力隨作用時間的延長逐漸降低，而克隆形成抑制率隨作用時間的延長逐漸升高。分光光度法結(jié)果顯示：各實驗組細胞內(nèi)腸型ALP比活性與對照組相比均顯著升高(P<0.01)，且各實驗組之間表現(xiàn)出明顯的時間依賴趨勢（各實驗組之間相比均為P<0.05）；細胞培養(yǎng)液中LDH

4、活性測定結(jié)果顯示各實驗組細胞培養(yǎng)液中LDH活性均高于對照組且差別具有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01)。隨著IP6作用時間的延長，細胞培養(yǎng)液內(nèi)的LDH活性逐漸升高(各實驗組之間相比均為P<0.05)。RT-PCR實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，各IP6作用組bcl-2和c-My.mRNA表達均顯著降低，差別具有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01)；而且bcl-2和c-My.mRNA表達均表現(xiàn)出隨IP6作用時間延長而逐漸降低的趨勢。免疫細胞化學實驗結(jié)果

5、表明：不同作用時間的IP6均可抑制HT-29細胞內(nèi)的PCNA蛋白表達(P<0.05)，并且隨著作用時間的延長，PCNA蛋白的表達隨之降低（各IP6作用時間組之間相比均為P<0.05）；不同作用時間的IP6作用均可升高細胞內(nèi)細胞色素.(Cyt-c)的水平（P<0.01），且隨作用時間的延長，Cyt-c蛋白的表達有升高的趨勢(各IP6作用時間組之間相比均為P<0.05)。 結(jié)論：1、IP6作用能夠使HT-29細胞裸鼠體內(nèi)致瘤能力的降

6、低，表現(xiàn)為成瘤時間延長、成瘤體積減小及成瘤率降低，作用具有時間依賴趨勢。2、IP6能夠抑制HT-29細胞的增殖，使細胞克隆形成能力降低及細胞內(nèi)PCNA水平的降低，且隨作用時間的延長作用更加明顯。3、IP6具有促進HT-29細胞分化的作用，這一作用表現(xiàn)在細胞集落形成能力的降低、細胞內(nèi)分化相關(guān)基因c-Myc表達的減低以及分化標志酶--腸型堿性磷酸酶比活性的升高，作用表現(xiàn)出明顯的時間依賴趨勢。4、IP6可以促進HT-29細胞發(fā)生凋亡，這一作用