幽門螺桿菌感染與原發(fā)性膽囊癌相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探討人類原發(fā)性膽囊癌的發(fā)生是否與幽門螺桿菌（Helicobacter pylor，Hp）的感染有關(guān)，為原發(fā)性膽囊癌的治療提供新的思路。
　　 方法：采用病例對照研究，選取18例原發(fā)性膽囊癌（primary carcinoma of the gallbladder，PCG）和40例慢性膽囊炎、膽結(jié)石（chronic cholecystitis or cholelithiasis，CC）患者的血清標(biāo)本以及手術(shù)后的膽囊粘膜、膽汁

2、標(biāo)本進行Hp檢測，選取20例排除PCG和CC的患者作為對照。采用ELISA方法檢測各組血清中Hp IgG的存在；利用微氧培養(yǎng)基從新鮮膽囊粘膜和膽汁標(biāo)本培養(yǎng)螺桿菌；DNAzol提取膽囊粘膜和膽汁中的DNA，采用巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）方法擴增螺桿菌特異的16S rRNA基因；對PCG組螺桿菌16S rRNA基因陽性的樣品檢測Hp特異26KDa蛋白基因和4個相關(guān)功能基因（cagA、va

3、cA、rps4、ureA），并進行測序分析，確定檢出的細菌是否為Hp；westerblot檢測Hp相關(guān)功能蛋白UreA、UreB、VacA和CagA，初步探討Hp感染導(dǎo)致PCG發(fā)生的機制。
　　 結(jié)果：⑴術(shù)前一天，PCG組中，18份血清標(biāo)本中有16份顯示為Hp IgG陽性，陽性率為88％；CC組中，40份血清標(biāo)本有25份顯示為Hp IgG陽性，陽性率為63％；對照組中，20份血清標(biāo)本有7份顯示為Hp IgG陽性，陽性率為35％；

4、PCG組中Hp IgG陽性率明顯高于CC組和對照組。術(shù)后，Hp IgG陽性率逐漸下降，術(shù)后一年，三組Hp IgG陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。⑵PCG、CC和對照組患者新鮮膽囊粘膜或膽汁標(biāo)本中均未能培養(yǎng)出螺桿菌。⑶PCG組中，36份膽囊粘膜和膽汁標(biāo)本有29份檢出螺桿菌屬特異性16S rRNA基因，陽性率為81％；CC組中，80份膽囊粘膜和膽汁標(biāo)本有40份檢出16S rRNA基因，陽性率為50％；對照組中，40份膽囊粘膜和膽汁標(biāo)本有8份檢出16

5、S rRNA基因，陽性率為20％；其中PCG組16S rRNA基因檢出率明顯高于CC組和對照組，CC組螺桿菌基因檢出率顯著高于對照組。⑷29份螺桿菌16S rRNA基因陽性的膽囊粘膜或膽汁標(biāo)本中，15份cagA基因陽性，陽性率為52％；25份26KDa基因陽性，陽性率為86％；14份ureA基因陽性，陽性率為48％；vacA基因和rps4基因陽性率均為零。27份標(biāo)本cagA、26KDa、vacA、ureA和rps4基因至少一項陽性，陽性

6、率為93％。⑸29份螺桿菌16S rRNA基因陽性的膽囊粘膜或膽汁標(biāo)本經(jīng)測序鑒定，與Hp有99％以上的同源性。⑹PCG組中，UreA、UreB、VacA和CagA蛋白陽性率分別為39％、11％、6％和42％；CC組中，UreA、UreB、VacA和CagA蛋白陽性率分別為24％、11％、8％和29％；對照組中，UreA、UreB、VacA和CagA蛋白陽性率分別為7％、10％、5％和10％；PCG組CagA和UreA蛋白的陽性率及平均光