軸突導向因子netrin-1在先天性巨結腸中表達分布及意義.pdf

1、目的：
　　 先天性巨結腸（Hirschsprung's disease，HD）是一種先天性疾病，發(fā)病率為1/5000，本病以腸道不同長度的局部神經節(jié)細胞缺失為主要病理特征。臨床上表現(xiàn)為功能性慢性腸梗阻，這是由于局部喪失正常的舒縮功能導致腸管不能將腸內容物正常排出。目前的研究已經證實先天性巨結腸是一種腸神經系統(tǒng)（Entericnervous system，ENS）發(fā)育異常的疾病，是由于胚胎期神經嵴干細胞沿腸壁遷移、分化過程及在腸

2、壁內定位成熟出現(xiàn)障礙而導致的。
　　 腸神經系統(tǒng)（ENS）是外周神經系統(tǒng)的一部分，在很大程度上獨立于中樞神經系統(tǒng)，又與其非常相似。負責協(xié)調腸道復雜的活動方式。ENS可以監(jiān)測管腔和腸壁的狀態(tài)，做出適當回應，激活內在反射，產生混合與推進蠕動運動和改變血液流量以及分泌水和電介質。大多數(shù)的腸神經神細胞來自起源于神經管1-7體節(jié)的迷走神經嵴干細胞，不同的迷走神經嵴細胞分布到不同區(qū)域的腸管。一小部分前腸神經細胞也是起源于后迷走區(qū)的前干神經嵴

3、細胞。整個過程從胚胎第六周開始到第十二周時完成。
　　 Netrin-1是Netrins家族中的一個重要成員。Netrin-1作為神經軸突導向因子既能定向誘導神經軸突生長，也在腸神經嵴干細胞的遷移過程中發(fā)揮重要的作用。目前有關Netrin-1在腸神經系統(tǒng)的研究集中在動物的胚胎學方面，尚無有關Netrin-1在人類腸道表達、分布的報道。本研究的目的是觀察Netrin-1在HD患者正常段結腸和痙攣段結腸道中的分布、表達是否存在差異，

4、從而進一步探討其在HD發(fā)病機制中所起的作用。
　　 方法：
　　 一、病例與標本
　　 收集2008年1月-2009年10月本院病理科36例小兒先天性巨結腸石蠟標本，其中男性32例、女性4例，年齡1月-5歲。其中長段型5例，短段型例4例，常見型27例。這些患兒均為散發(fā)、無HD家族遺傳病史。
　　 二、實驗試劑
　　 1、Netrin-1（H-104）：sc-20786多克隆抗體購自美國SANTA

5、CRUZ BIOTECHNOLOGY公司。
　　 2、SP試劑盒及DAB顯色劑購自北京中杉金橋有限公司。
　　 三、實驗方法
　　 將36例HD患兒的正常段腸管與痙攣段腸管分為對照組和實驗組，采用抗Netrin-1多克隆抗體免疫組織化學方法檢測netrin-1在各組中的分布及表達。采用SSPS 13.0 for windows統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。將對照組、實驗組中腸壁肌層、粘膜層netrin-1的表達分別進行

6、差異性檢驗，檢驗采用t檢驗。
　　 結果：
　　 在對照組（正常段）腸管中肌層（縱肌、環(huán)?。?、肌間神經節(jié)及粘膜層均見netrin-1表達，實驗組（痙攣段）中肌層及粘膜層亦可見netrin-1表達，兩組間netrin-1的表達強度進行差異性檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。
　　 結論：
　　 本研究Netrin-1在HD患兒正常段和痙攣段腸管的肌層、粘膜層表達在統(tǒng)計學上無顯著差異可能說明netrin