重組逆病毒載體介導(dǎo)HSVtk自殺基因的調(diào)控性研究及在乳腺癌基因治療中的應(yīng)用.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文重組逆病毒載體介導(dǎo)HSVtk自殺基因的調(diào)控性研究及在乳腺癌基因治療中的應(yīng)用姓名：曾趙軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：胡維新20040501博士學(xué)位論文中文摘要GCV轉(zhuǎn)變成為一一種有毒的代謝產(chǎn)物，從而殺死乳腺癌細(xì)胞。用MCF／TRE／HSVtk／TetOn細(xì)胞接種SCID小鼠建立人乳腺癌SCID小鼠模型，Dox誘導(dǎo)7天腹腔內(nèi)注射GCV治療23天后發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組比較乳腺癌SCID小鼠經(jīng)DoxGCV

2、治療后，腫瘤體積明顯減小，生長(zhǎng)受抑，組問(wèn)比較有顯著性差異(P005)；HE染色發(fā)現(xiàn)治療組腫瘤有局部壞死，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。RTPCR結(jié)果顯示Dox誘導(dǎo)后腫瘤組織HSVtk表達(dá)較明顯。結(jié)果顯示在Dox的誘導(dǎo)作用下，GCV對(duì)可調(diào)控性自殺基因乳腺癌SCID小鼠有顯著治療作用。在此基礎(chǔ)上，將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pRevTRE、pRevTRE／tk、pRevTet0n等通過(guò)微乒乓轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入包裝細(xì)胞PA317中，分別以HygromycinB、G418篩選克隆

3、細(xì)胞，濃縮克隆細(xì)胞上清收集病毒。以重組逆轉(zhuǎn)錄病毒pRevTRE／tk為例在不同時(shí)間及不同丁酸鈉濃度下，檢測(cè)分析經(jīng)篩選獲得陽(yáng)性克隆的細(xì)胞上清有無(wú)HSVtk基因的表達(dá)及如何獲得高滴度的重組病毒液。收集以上逆轉(zhuǎn)錄病毒上清并以差速離心法濃縮病毒上清，經(jīng)初步純化所得即為重組逆轉(zhuǎn)錄病毒。以重組逆轉(zhuǎn)錄病毒RevTRE／HSVtk感染宿主細(xì)胞MCF一7并經(jīng)HygromycinB篩選后，進(jìn)行Southern印跡雜交檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該重組病毒能夠?qū)⒛康幕蛘系?/p>