睫狀神經營養(yǎng)因子對視神經損傷保護效應的實驗研究.pdf

1、目的:(1)研究睫狀神經營養(yǎng)因子及其受體在視神經損傷后不同時間視網(wǎng)膜中的表達及細胞定位;(2)了解玻璃體內、眼球后及皮下注射時,重組人睫狀神經營養(yǎng)因子在SD大鼠重要器官及眼內的分布情況,確定最佳及最易接受的眼部給藥方式;(3)探討眼球后注射外源性CNTF是否對實驗性的視神經損傷有保護作用;(4)探討CNTF對原供培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞、膠質細胞及晶體上皮細胞生長的影響;(5)了解CNTF在眼局部應用的眼部及全身毒副作用.方法:(1)

2、采用鉗夾視神經的方法建立神經損傷的模型,在損傷后1天、7天、14天、28天獲取視網(wǎng)膜,用RT-PCR測定視網(wǎng)膜中CNTFmRNA及其受體CNTFRα mRNA的表達,用West Blotting方法了解CNTF及其受體蛋白水平的表達,用免疫熒光的方法了解CNTF在視網(wǎng)膜各層中的表達和分布情況.(2)采用Iodogen法對rhCNTF進行放射性<'125>I標記,SD在鼠分為皮下注射組、眼球后注射組及玻璃體內注射,分別于注射后30分、1小

3、時、2小時、3小時、24小時檢測視網(wǎng)膜、玻璃體、視神經、腎、肝、腦、脾等組織單位質量放射性攝取百分數(shù)(％ID/g).(3)建立鉗夾傷視神經損傷模型,分為對照組及CNTF實驗組,通過電鏡、光鏡觀察視網(wǎng)膜各層及視神經形態(tài),分為對照組及CNTF實驗組,通過電鏡、光鏡觀察視網(wǎng)膜各層及視神經形態(tài),并計數(shù)視網(wǎng)膜各層細胞和測量視網(wǎng)膜各層厚度,通過電生理F-VEP檢查來了解視功能.(4)體外培養(yǎng)人RPE、RGC細胞,分離純化并鑒定,取第4代細胞接種于9

4、6孔板,加入不同濃度的CNTF或bFGF,MTT法檢測對視網(wǎng)膜兩種細胞生長的影響;LEC培養(yǎng)液中加入CNTF,光鏡觀察形態(tài).(5)選用正常成年兔,實驗分為3組,玻璃體內注射不同劑量的CNTF,注射后每天直接檢眼鏡觀察眼底,光鏡、電鏡觀察視網(wǎng)膜及角膜,電生理了解視網(wǎng)膜功能;光鏡觀察肝腎重要臟器的改變.(6)SPSS 10.0進行統(tǒng)計分析.結論:(1)神經損傷后CNTF-mRNA的表達先短暫升高以后持續(xù)下調,而CNTFRα-mRNA在損傷后