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1、我們以原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞為基礎,對培養(yǎng)細胞予以10nmol/L ET-1作用24h,建立肥大心肌細胞實驗模型.經(jīng)HE染色測量心肌細胞表面面積,并結(jié)合偶合FITC的鬼筆環(huán)肽熒光染色分析心肌細胞肥大特征征實此肥大心肌細胞模型穩(wěn)定、可靠、重復性好,可用于后續(xù)實驗.在此模型基礎上,用AngⅡ作用于肥大心肌細胞24h,采用Hoechst 33258熒光染色和原位缺口末端標記法(TUNEL)進行細胞凋亡的檢測,利用Western blot分
2、析培養(yǎng)細胞caspase-9和線粒體PDCδ含量的改變,并利用底物顯色法測量caspase-3的活性變化.該研究觀測了ET-1和AngⅡ?qū)π募〖毎蚀蠛偷蛲雎实挠绊?建立了心肌細胞肥大模型,證實了肥大心肌細胞凋亡易感性增加,發(fā)現(xiàn)肥大心肌細胞凋亡過程中伴有PKCδ向線粒體的轉(zhuǎn)位和caspase-9、caspase-3活性增強.該研究在上述實驗結(jié)果基礎上提出肥大心肌細胞的凋亡是由線粒體凋亡途徑介導的,PKCδ向線粒體的轉(zhuǎn)位是線粒體凋亡途徑激
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