TNF-α、MMP-2,MAPK和NF-κB在人類子宮肌瘤發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的：
　　子宮肌瘤是女性生殖器官中最常見(jiàn)的良性腫瘤，發(fā)病機(jī)理不楚。已有研究證明在正常子宮肌轉(zhuǎn)變成子宮肌瘤以及子宮肌瘤體積增長(zhǎng)的過(guò)程中均伴隨著腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factors-alpha，TNF-α)和腫瘤壞死因子受體I(tumor necrosis factor receptor I，TNF RI)表達(dá)的變化。檢測(cè)TNF-α、MMP-2、MAPK和NF-κB在人子宮肌瘤中的表達(dá)，探討其在子宮肌瘤發(fā)病

2、中的作用，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　(1)收集子宮肌瘤組織和鄰近正常的子宮肌組織為對(duì)照，采用Western blot和real-time PCR檢測(cè)組織中TNF-α的表達(dá)；(2)采用酶消化法分離培養(yǎng)人子宮平滑肌細(xì)胞(Human myometrium smooth muscle cells，HM-SMCs)及人子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞(Human leiomyoma smooth muscle cells，HL-SM

3、Cs)，Western blot，real-time PCR檢測(cè)細(xì)胞中TNF-α、MMP-2的表達(dá)情況；(3)20 ng/mlTNF-α處理HM-和HL-SMCs，作用0，5min，15min，30min，60min，Western blot檢測(cè)p44/42MAPK、IκBα的表達(dá)及磷酸化變化；20ng/mlTNF-α處理HM-和HL-SMCs作用0，2h，12h，24h，48h，檢測(cè)MMP-2蛋白表達(dá)，real-time PCR檢測(cè)M

4、MP-2 mRNA的表達(dá)；(4)用p44/42 MAPK信號(hào)通路抑制劑PD98059處理細(xì)胞后檢測(cè)p44/42MAPK的表達(dá)及磷酸化；用NF-κB信號(hào)通路抑制劑Bay11-7082處理細(xì)胞后檢測(cè)IκBα的表達(dá)及磷酸化變化；Western blot檢測(cè)PD98059、Bay11-7082預(yù)處理后TNF-α誘導(dǎo)的MMP-2的變化。
　　結(jié)果：
　　1.與相應(yīng)的正常子宮肌相比，卵泡期子宮肌瘤組織中的TNF-α、MMP-2表達(dá)升高，

5、而黃體期子宮肌和子宮肌瘤的表達(dá)差異不明顯。TNF-α處理細(xì)胞后，用Western blots和Real-time PCR方法檢測(cè)MMP-2的時(shí)間依賴性變化，結(jié)果顯示卵泡期HL-SMCs中MMP-2表達(dá)量隨TNF-α的作用時(shí)間延長(zhǎng)而升高。TNF-α作用24h、48h時(shí)，MMP-2表達(dá)顯著升高，而在卵泡期HM-SMCs中TNF-α作用時(shí)間與MMP-2的表達(dá)無(wú)明顯關(guān)系。
　　2.TNF-α能夠激活卵泡期HL-SMCs中的p44/42 M

6、APK信號(hào)通路，且呈時(shí)間依賴性激活，TNF-α作用15min時(shí)最明顯；并且MEK抑制劑PD98059能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的p44/42 MAPK磷酸化；卵泡期HM-SMCs中phospho-p44/42MAPK無(wú)明顯改變。
　　3.TNF-α誘導(dǎo)的total-IκBα和phospho-IκBα在卵泡期HM-和HL-SMCs中的變化趨勢(shì)基本一致，TNF-α作用5min時(shí)phospho-IκBα升高最明顯；NF-κB信號(hào)通路抑制劑B

7、ay117082能夠抑制卵泡期HL-SMCs中TNF-α對(duì)phospho-IκBα的誘導(dǎo)作用，對(duì)卵泡期HM-SMCs中TNF-α誘導(dǎo)的IκBα磷酸化無(wú)明顯抑制作用。
　　4.用PD98059和Bay11-7082對(duì)細(xì)胞預(yù)處理后，可明顯抑制卵泡期HL-SMCs中TNF-α誘導(dǎo)的MMP-2蛋白表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論：
　　卵泡期子宮肌瘤中高表達(dá)TNF-α、MMP-2，TNF-α可時(shí)間依賴性激活卵泡期HL-SMCs中NF-κB