葛根提取物對子宮內(nèi)膜癌細胞體外增殖的影響及機理研究.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜癌又稱子宮體癌，是女性生殖道系統(tǒng)常見的三大惡性腫瘤之一，高發(fā)年齡為58～61歲，約占女性癌癥總數(shù)的7％，已占到女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20％～30％。子宮內(nèi)膜癌是一種起源于子宮內(nèi)膜的雌激素依賴性惡性腫瘤。近年來，隨著激素替代治療(HRT)廣泛應用，子宮內(nèi)膜癌在我國發(fā)病率逐年上升，與宮頸癌比較，已趨于接近甚至超過，受到研究者高度重視。雖然有多家研究機構(gòu)致力于子宮內(nèi)膜癌的研究工作，但對其發(fā)病機制仍不十分明確。更深入的研究工作仍需

2、要進一步開展。為此，本實驗以子宮內(nèi)膜癌細胞系Ishikawa細胞為研究對象，研究子宮內(nèi)膜癌的主要發(fā)病機制，首次探討葛根提取物對Ishikawa細胞的影響，以及葛根提取物抑制Ishikawa細胞體外增殖作用機制，為中醫(yī)藥治療子宮內(nèi)膜癌提供理論基礎和體外實驗的資料。 方法： 1、MTT法分別地檢測葛根提取物對Ishikawa細胞體外增殖的抑制作用：不同濃度葛根提取物處理Ishikawa細胞48小時后，測定光吸收值，計算抑制率

3、，獲得量效數(shù)據(jù)。取IC50濃度葛根提取物處理Ishikawa細胞24、48、72、96、120小時后，測定光吸收值，計算抑制率，獲得時效數(shù)據(jù)。 2、流式細胞術(shù)分別測定葛根提取物對Ishikawa細胞周期及凋亡的作用：不同濃度葛根提取物處理Ishikawa細胞48小時后，固定細胞，RNAase消化半小時，PI避光染色1小時，上機檢測，ModiFit軟件進行細胞周期分析并繪制DNA分布圖。 3、RT-PCR法檢測葛根提取物、

4、雌二醇、孕激素對Ishikawa細胞ERRαmRNA表達的調(diào)節(jié)作用：不同濃度葛根提取物、雌二醇、孕激素處理Ishikawa細胞48小時后，提取總RNA，進行RT-PCR反應后，電泳、凝膠圖像分析儀器采集圖像，分析灰度值。 結(jié)果： 1、葛根提取物對Ishikawa細胞體外增殖作用有明顯的抑制作用，并隨著藥物濃度增加其抑制作用更加明顯，在一定濃度范圍內(nèi)均呈劑量依賴性。葛根提取物對Ishikawa細胞體外增殖抑制最顯著的時間是

5、加藥后48小時，加藥后72小時的抑制率雖然有所上升，但不甚明顯，加藥后96小時其抑制率稍低，加藥后120小時其抑制率明顯降低。 2、低濃度葛根提取物(10、20μmol/L)時，G0-G1期細胞比例無明顯變化。較高濃度(40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L)葛根提取物作用于Ishikawa細胞時，隨著濃度的增加而G0-G1期細胞比例明顯下降。低濃度葛根提取物(10、20μmol/L)時，G2-M期細胞比例無明顯變

6、化。較高濃度(40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L)葛根提取物作用于Ishikawa細胞時，隨著濃度的增加而G2-M期細胞比例明顯增加。葛根提取物作用于Ishikawa細胞48小時后，結(jié)果均未見凋亡峰出現(xiàn)。 3、低濃度(10、20、40μmol/L)葛根提取物作用于Ishikawa細胞時，ERRαmRNA的表達量隨著濃度的增加而明顯急劇下降，以40μmol/L濃度下降效果最明顯，但其作用較弱雌二醇弱。當葛根提取物

7、濃度達到一定濃度(80、160μmol/L)時，ERRαmRNA的表達量隨著濃度的增加而上升，其作用較孕酮稍弱。 結(jié)論： 1、葛根提取物明顯抑制Ishikawa細胞體外增殖作用，并隨著藥物濃度增加其抑制作用更加明顯，在一定濃度范圍內(nèi)均呈劑量依賴性。葛根提取物對Ishikawa細胞體外增殖抑制最顯著的時間是加藥后48小時。 2、葛根提取物使Ishikawa細胞G0-G1期細胞比例下降，G2-M期細胞比例與對照組增加