原發(fā)性高血壓患者血清FGF21水平檢測和FGF21基因載體的構建及表達.pdf

1、目的：
　　1.檢測原發(fā)性高血壓患者血清成纖維細胞生長因子21(FGF21)水平，初步探討FGF21與原發(fā)性高血壓的相關性。
　　2.構建人和小鼠FGF21表達載體，并在大腸桿菌中表達，純化后獲得小鼠和人的FGF21融合蛋白。為后期動物實驗作準備。
　　方法：
　　1.實驗對象分為三組，原發(fā)性高血壓伴動脈粥樣硬化組（n=10）、原發(fā)性高血壓非動脈粥樣硬化組（n=20），正常對照組（n=30）。采用酶法測定血清甘油

2、三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平，血清FGF21、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）水平采用酶聯(lián)免疫法測定。
　　2.分別從人和小鼠肝臟提取總RNA后，經(jīng)RT-PCR擴增獲得目的片段，構建其T載體進行保存。以T載體為模板，擴增FGF21 mat-peptide，連接至pGEX-4T-3、 pET-28a(+)表達載體中，構建重組原核表達質粒pGEX-4T-3-MF

3、GF21、pET-28a(+)-MFGF21、pGEX-4T-3-HFGF21、 pET-28a(+)-HFGF21。將各重組質粒轉化至大腸桿菌菌株BL21（DE3）中，經(jīng)IPTG誘導表達，表達產物經(jīng)SDS-PAGE電泳以鑒定是否為可溶性表達，采用親和層析法純化各表達產物后，進行Western blotting鑒定。
　　結果：
　　1.原發(fā)性高血壓伴動脈粥樣硬化組、原發(fā)性高血壓非動脈粥樣硬化組血清FGF21、ox-LDL、

4、TG水平均明顯高于對照組（P<0.05）；線性相關分析顯示血清FGF21水平與ox-LDL、TG均呈正相關。
　　2.成功構建重組質粒 pGEX-4T-3-MFGF21、 pET-28a(+)-MFGF21、pGEX-4T-3-HFGF21、 pET-28a(+)-HFGF21?？扇苄员磉_后成功純化出GST-MFGF21、his-MFGF21、GST-HFGF21、his-HFGF21，經(jīng)Western-blotting鑒定為目的