hTFPI重組蛋白表達條件的優(yōu)化.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩70頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、在多種疾病進程中，包括癌癥、心腦血管疾病和炎癥等，由組織因子(tissUe factor，TF)引發(fā)的外源性凝血系統(tǒng)的激活扮演重要角色，一些患者因此致死。組織因子途徑抑制因子(tissue factorpathwav inhibitor，TFPI)是抑制外源凝血的一種重要蛋白因子。大量臨床實驗和動物實驗證明，重組人組織因子途徑抑制因子(humanrecombinant tissue factor pathway inhibitor，rh

2、TFPI)對血栓形成、感染性休克、血管再狹窄、內毒素血癥和DIC等具有明顯防治作用，在臨床上有廣泛的應用前景。 目前，用多種表達系統(tǒng)表達rhTFPI的效果很不理想，存在的主要問題是表達量較低，以哺乳動物細胞表達系統(tǒng)的表達量最高(約2-5mg/L)，但成本也最高。我們應用巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)進行了rhTFPI的表達。通過優(yōu)化表達條件，使搖瓶培養(yǎng)下的rhTFPI的表達量達到了1.6mg/L；應用發(fā)酵罐進行高密度培養(yǎng)后，表達量比搖瓶

3、培養(yǎng)方式提高了近2倍，達到了4.6mg/L。隨后，我們建立了相應的純化方法，應用了硫酸銨分級沉淀，陰離子交換層析和凝膠過濾層析，純化收率為43.1±O.38％，蛋白純度大于95％。實驗結果顯示，利用巴斯德畢赤酵母表達rhTFPI與其他表達系統(tǒng)相比具有以下優(yōu)勢：與哺乳動物細胞表達系統(tǒng)相比具有成本優(yōu)勢，無論是細胞培養(yǎng)成本和還是蛋白純化成本，前者都比后者明顯低廉；與大腸桿菌表達體系相比，具有表達量高，純化簡單，且重組蛋白翻譯后修飾更接近于天然

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論