大腸癌組織中酪氨酸激酶受體RON的表達及意義.pdf

1、本實驗通過免疫組織化學方法檢測了大腸癌組織中RON的表達水平，并對這些術后病例進行長期隨訪，以分析RON表達和大腸癌臨床病理分期和預后的關系。 手術標本：隨機收取浙江大學醫(yī)學院附屬邵逸夫醫(yī)院1999年8月至2005年4月間的大腸癌根治切除術手術標本； 試劑：兔抗人RON抗體，即用型免疫組織化學超敏S-P試劑盒； 儀器：HPIAS-100高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)9.0及配套顯微鏡等。 實驗方法和步驟：

2、 1.全部組織標本以10％甲醛固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片后進行免疫組化染色。本實驗采用鏈霉抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組織化學方法(S-P法)，按照S-P試劑盒所附說明書操作。一抗作用時間為室溫條件下0.5h，稀釋濃度為1：50。設立轉染RON的NIH-3T3細胞為陽性對照，以PBS代替一抗作為空白對照。 2.鏡下觀察腫瘤細胞胞漿內出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色，整張玻片內腫瘤組織區(qū)域分為20個區(qū)，每個區(qū)內隨機取1個鏡下視野

3、(100×)，采用HPIAS-100高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)對鏡下采取的圖像進行分析，記錄視野內胞漿染色區(qū)灰度值，求20個區(qū)的平均數作為該腫瘤的平均灰度值。其中染色強度越高，灰度值越小。 3.采用SPSS10.0軟件包進行統(tǒng)計，計量資料采用Dunnett’sT3檢驗進行單因素方差分析，研究RON表達強度和大腸癌臨床病理分期之間的關系。 4.對納入實驗的病例進行臨床隨訪，統(tǒng)計3年生存率，并采用Kaplain-Meier

4、模型分析可能對大腸癌術后生存期產生影響的臨床因素。 研究結果與討論： 1.RON在不同大腸組織中的表達：RON在正常大腸粘膜、大腸腺瘤、大腸癌組織中均見陽性表達。且在大腸腺瘤及大腸癌中的表達強度高于正常大腸粘膜(P＜0.05)。但大腸腺瘤與大腸癌組織間RON的表達強度之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。提示在上皮性腫瘤細胞中RON的表達發(fā)生了改變，其異常變化可能參與了由正常大腸上皮到大腸腫瘤的惡性變過程。且癌組織和腺瘤

5、之間RON表達無明顯差異，提示RON在腫瘤發(fā)生早期即開始起作用。 2.RON的表達與大腸癌臨床病理分期的關系：在高，中，低分化等不同分化程度的大腸癌組織中，RON的表達強度雖然逐步上升，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，在不同浸潤深度的大腸癌組織中，RON的表達隨著浸潤層次的深入而增強(P＜0.05)，且RON的表達和大腸癌的淋巴結轉移及Duke’s分期有關，其表達強度隨淋巴結轉移和Duke’s分期的升高而增高(P＜0.05)

6、，但C期與D期之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。提示RON的過表達可能在腫瘤的浸潤轉移過程中起一定作用，且RON表達強度隨病理分期升高而增加，也支持了RON和大腸癌侵襲轉移相關的觀點。 3.RON表達和大腸癌預后的關系：大腸癌術后平均總生存期為(31.5±2.2)個月，無瘤生存期為(27.5±2.2)個月。3年總生存率為77.21％，無瘤生存率為76.05％。Kaplain-Meier分析顯示RON的表達值的強弱對術后生存期

7、無明顯影響(P＞0.05)，除此之外，Duke’s分期和淋巴結轉移對總生存期和無瘤生存期有顯著影響(P＜0.05)，而浸潤深度，分化程度對生存期無明顯影響(P＞0.05)。 研究結論： 1.RON在不同大腸組織中均有表達，且大腸腫瘤中RON的表達要高于正常大腸上皮。 2.RON在大腸癌中的表達隨病理分期升高而增強。 3.RON和大腸癌的發(fā)生和侵襲進展密切相關。 4.RON對大腸癌術后生存期無明顯影