MUS81基因在喉癌中的突變和表達.pdf

1、喉鱗狀細胞癌(LaryngealSquamousCellCarcinoma，LSCC，喉癌)是東北地區(qū)常見的惡性腫瘤，和其他腫瘤一樣，喉癌的發(fā)生是一個多基因參與的、多階段的復雜過程。多種癌基因、抑癌基因、細胞周期調(diào)節(jié)基因、及其維持細胞基因組穩(wěn)定性的基因等異常都可能導致腫瘤的發(fā)生。MUS81(Methylmethansulfonate，UVsensitive)基因?qū)NA損傷修復期間產(chǎn)生的重組中間產(chǎn)物起作用，可以維持基因組的穩(wěn)定性，因此對

2、于防止腫瘤的發(fā)生是至關(guān)重要的。但該基因在喉癌發(fā)生發(fā)展中的機制尚不十分清楚。我們研究了MUS81基因在喉癌中的突變及表達，探討其與喉癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。 材料與方法:1.實驗材料：30例標本來源于中國醫(yī)科大學附屬第一臨床學院耳鼻喉科患者手術(shù)切取標本。病理結(jié)果證實均為喉鱗狀細胞癌，術(shù)前未經(jīng)化療和放療。TRIZOLReagent(GIBCOBRL公司)、TaqDNA聚合酶、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、DNA純化試劑盒購自Promega公司；蛋白酶K

3、、聚丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺(MERCK公司)、硝酸銀。 2.實驗方法：PCR-SSCP技術(shù)結(jié)合DNA測序檢測分析了喉癌患者MUS81基因第9、10外顯子的突變(MUS81基因的功能域跨第9、10外顯子)，并用半定量RT-PCR方法分析其在喉癌組織中的表達情況。 結(jié)果:1.PCR-SSCP分析及DNA測序檢測表明，在30例喉癌、癌旁組織標本中，30例癌旁組織均無突變，而8例喉癌組織第9外顯子發(fā)現(xiàn)有突變，占26.67％(8

4、/30)，6例喉癌組織第10外顯子有突變，占20％(6/30)，30例中1例在第9、10外顯子均發(fā)生突變，占3.33％(1/30)。14例突變樣品中，有2例表現(xiàn)為雜合性，均發(fā)生在第9外顯子。其余12例均為純合性突變。 2.RT-PCR結(jié)果表明，30例喉癌中有12例MUS81基因mRNA表達下調(diào)，占40％(12/30)。經(jīng)統(tǒng)計學分析，腫瘤組與對照組差異顯著(t=2.208，P＜0.05)。 3.經(jīng)χ2檢驗分析MUS81基因

5、突變與表達下調(diào)有顯著相關(guān)性(P＜0.05)。統(tǒng)計結(jié)果顯示喉癌MUS81基因突變與TMN分期有相關(guān)性(P＜0.05)，與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P＞0.05)。MUS81基因表達下調(diào)與TMN分期、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P＞0.05)。 結(jié)論:一、首次證明MUS81基因第9、10外顯子在喉癌組織中發(fā)生突變，其突變可能是引起人類喉癌因素之一。 二、首次證實MUS81基因在喉癌中表達下調(diào)。經(jīng)統(tǒng)計學分析，腫瘤組與對照組差異