放療對角質形成細胞上皮間質轉化的影響.pdf

1、背景:瘢痕疙瘩是一種病理性瘢痕，在臨床上非常多見，具有發(fā)紅、瘙癢、刺痛和燒灼感等顯著的臨床表現(xiàn)，給患者帶來很大的生理和心理負擔。瘢痕疙瘩的發(fā)病機制并不明確，最新研究發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩的發(fā)生可能與上皮間質轉化(EMT)相關，瘢痕疙瘩中的成纖維細胞可能是角質形成細胞經(jīng)EMT轉化而來。瘢痕疙瘩的治療方法眾多，但無論是手術還是單一無創(chuàng)治療的復發(fā)率均較高。手術切除聯(lián)合術后放療的方法是治療瘢痕疙瘩最有效的方法。目前尚無研究從EMT角度出發(fā)探索術后放療抑制

2、瘢痕疙瘩復發(fā)的作用機制。
　　目的:探索放療對人角質形成細胞上皮間質轉化的影響。
　　方法:對人永生化角質形成細胞HaCaT細胞給予10ng/ml TGF-β1處理，以未經(jīng)處理的角質形成細胞作為陰性對照，以從手術標本原代培養(yǎng)得到的成纖維細胞作為陽性對照，觀察細胞的形態(tài)變化，測定處理后1天、3天與7天上皮化與間質化標志物的表達，確認是否成功構建EMT模型。對一組HaCaT細胞進行9Gy放療，對另一組HaCaT細胞同時給予9Gy

3、放療與10ng/ml TGF-β1處理。觀察陰性對照組、放療組與放療聯(lián)合TGF-β組細胞的形態(tài)變化，進行劃痕實驗檢測細胞的遷移能力，測定處理后1天、3天與7天上皮化與間質化標志物的表達。
　　結果:
　　1.對HaCaT細胞進行10ng/ml TGF-β1處理后，觀察到細胞形態(tài)從典型的角質形成細胞形態(tài)轉變?yōu)轭愃瞥衫w維細胞的形態(tài);而放療后細胞形態(tài)未發(fā)生明顯的變化，同時細胞死亡速率加快。
　　2.劃痕實驗結果顯示未經(jīng)處理的

4、HaCaT細胞遷移能力最弱，在TGF-β1誘導下發(fā)生了EMT的細胞遷移能力最強，對HaCaT細胞行放療之后，細胞的遷移能力略有增強，對HaCaT行放療與TGF-β1雙重處理之后，細胞的總體遷移能力與單純行TGF-β1處理相似，略弱于后者。
　　3.經(jīng)過TGF-β1處理后1天、3天和7天細胞的上皮化標志物ZO-1與CDH1的基因表達和蛋白表達顯著下調(P＜0.05)，間質化標志物CDH2的基因表達與蛋白表達上調，F(xiàn)N1的基因表達顯著

5、上調(P＜0.05)，Vimentin的蛋白表達上調。
　　4.放療后培養(yǎng)1天與3天的細胞中上皮化標志物的基因表達和蛋白表達均上調，間質化標志物的基因表達和蛋白表達下調。5.放療聯(lián)合TGF-β1組細胞除了E-Cadherin蛋白表達之外，其余上皮化標志物的基因表達和蛋白表達均高于TGF-β1組;間質化標志物除了CDH2的基因表達與TGF-β1組相似，其余標志物的基因表達和蛋白表達低于TGF-β1組。
　　結論:TGF-β1成