胸腺間充質(zhì)細(xì)胞促進(jìn)淋巴瘤生長及其機制研究.pdf

1、[研究背景]
　　 腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移與腫瘤細(xì)胞所處的內(nèi)外環(huán)境有著密切聯(lián)系。腫瘤基質(zhì)細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分。腫瘤基質(zhì)細(xì)胞由許多成分構(gòu)成，其中包括腫瘤間充質(zhì)細(xì)胞（間充質(zhì)干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞）、周細(xì)胞、巨噬細(xì)胞(TAM)、內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、其它炎癥細(xì)胞等。腫瘤細(xì)胞分泌細(xì)胞因子招募間充質(zhì)干細(xì)胞到達(dá)腫瘤組織，其功能和機制目前不清楚。CAFs(CancerAssociatedFibroblasts)是腫瘤基質(zhì)細(xì)胞最多和最重要的細(xì)胞。

2、CAFs為腫瘤提供所需營養(yǎng)，促進(jìn)腫瘤生長。同時CAFs可以分泌炎癥因子招募TAM到腫瘤組織中。TAM分為兩種類型，M1型和M2型。M1型殺傷腫瘤細(xì)胞，引起組織的破壞性反應(yīng)。在IL-4或者IL-13作用下，巨噬細(xì)胞展現(xiàn)M2型，能夠促進(jìn)組織修復(fù)、重塑，免疫調(diào)節(jié)及促進(jìn)腫瘤生長。
　　 我們課題組從胸腺中分離出胸腺間充質(zhì)細(xì)胞(Thymusstromalcells，TSC)，無論是從正常胸腺組織還是胸腺淋巴瘤組織中分離的基質(zhì)細(xì)胞，都能夠促

3、進(jìn)淋巴瘤細(xì)胞EL4的生長。伴隨淋巴瘤的胸腺間充質(zhì)細(xì)胞(TSC-L)與正常胸腺間充質(zhì)細(xì)胞(TSC-N)到底有什么樣的功能性差異，是我們課題研究的重點。研究結(jié)果顯示，伴隨淋巴瘤的胸腺間充質(zhì)細(xì)胞(TSC-L)比正常胸腺間充質(zhì)細(xì)胞(TSC-N)更能促進(jìn)腫瘤的生長，這是因為TSC-L能夠產(chǎn)生更多Ccl2，由此招募更多巨噬細(xì)胞到腫瘤組織內(nèi)形成TAMs。TAMs促進(jìn)腫瘤新血管生長和發(fā)揮免疫抑制作用。
　　 [研究目的]
　　 本課題主

4、要研究胸腺淋巴瘤來源的胸腺間質(zhì)細(xì)胞(TSC-L)和正常來源的胸腺間質(zhì)細(xì)胞(TSC-N)是否促進(jìn)淋巴瘤的生長，進(jìn)而對胸腺間充質(zhì)細(xì)胞影響腫瘤生長的機制進(jìn)行研究。
　　 [研究方法]
　　 為了完成上述研究目的，主要進(jìn)行以下實驗:
　　 1.TSC-L和TSC-N的獲取:p53-/-小鼠6個月自發(fā)胸腺淋巴瘤，研磨消化胸腺淋巴瘤，貼壁培養(yǎng)一天后，換液去掉未貼壁細(xì)胞，每隔2天換半液。正常的小鼠胸腺同樣處理，貼壁培養(yǎng)后獲取正

5、常對照細(xì)胞TSC-N。
　　 2.體內(nèi)實驗驗證TSC-L和TSC-N是否促進(jìn)腫瘤的生長:本實驗分為三組，TSC-L+EL4組，TSC-N+EL4組，EL4組，這三組分別皮下接種6-8周齡WT小鼠，每組至少三只，在接種后第六天，第九天，第十二天檢測腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線。
　　 3.流式細(xì)胞技術(shù)檢測腫瘤內(nèi)的TAMs:上述三組實驗，分別選取第六天，第九天，第十二天，獲取皮下腫瘤，研磨消化處理，流式細(xì)胞儀檢測CD11b，F(xiàn)

6、4/80表達(dá)情況。
　　 4.RT-PCR方法檢測TSC-L和TSC-N的Ccl2mRNA表達(dá)水平。
　　 5.慢病毒轉(zhuǎn)染sh-Ccl2質(zhì)粒到TSC-L中，對照組轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒，TSC-L-sh-Ccl2+EL4組，TSC-L-control+EL4組，分別皮下接種野生小鼠，在第6，9，12天檢測腫瘤生長情況，第6天利用流式細(xì)胞術(shù)檢測瘤內(nèi)TAMs比例。
　　 6.EL4+TSC-L分別皮下接種Ccr2-/-小鼠和W

7、T小鼠，然后檢測腫瘤生長情況，在第6天檢測這兩組實驗?zāi)[瘤內(nèi)的TAMs比例。
　　 [實驗結(jié)果]
　　 1.TSC-L相比于TSC-N更能促進(jìn)淋巴瘤EL4生長。
　　 2.TSC-L的Ccl2的mRNA表達(dá)量遠(yuǎn)高于TSC-N的Ccl2表達(dá)量。
　　 3.TSC-L+EL4組相比于TSC-N+EL4組，在第6，9，12天腫瘤內(nèi)TAMs前者高于后者。
　　 4.RNA干擾實驗結(jié)果顯示TSC-L-sh-C

8、cl2的Ccl2表達(dá)量明顯低于TSC-L-control的Ccl2表達(dá)量。
　　 5.TSC-L-sh-Ccl2+EL4組，TSC-L-control+EL4組分別皮下接種6-8周齡WT小鼠，前者腫瘤的生長速度明顯慢于后者的腫瘤生長速度，同時在第6天檢測腫瘤內(nèi)的TAMs，發(fā)現(xiàn)TSC-L-sh-Ccl2+EL4組的TAMs低于TSC-L-control+EL4組。說明TSC-L促瘤功能依賴其表達(dá)的Ccl2。
　　 6.TS

9、C-L+EL4組皮下接種6-8周齡ccr2-/-小鼠和野生小鼠，EL4+TSC-L(WTmice)組腫瘤生長速度快，皮下接種后第六天EL4+TSC-L(WTmice)組腫瘤內(nèi)TAMs比例明顯要與EL4+TSC-L(Ccr2mice)。說明TAMs招募依賴于趨化因子受體Ccr2。
　　 [結(jié)論]
　　 TSC-L和TSC-N都能夠促進(jìn)淋巴瘤的生長，TSC-L促瘤功能要強于TSC-N。TSCs促瘤功能是因為這兩種細(xì)胞都能分泌