EB病毒對WIF1基因甲基化和表達(dá)影響的研究.pdf

1、EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)為嗜淋巴細(xì)胞病毒屬的DNA腫瘤病毒，EBV感染與部分胃癌發(fā)生的關(guān)系已經(jīng)確認(rèn)，EBV相關(guān)胃癌(EBV-associated gastric carcinoma，EBVaGC)約占胃癌總數(shù)的10％。EBVaGC發(fā)生的表觀遺傳學(xué)機(jī)制的研究主要涉及EBV感染對抑癌基因啟動子區(qū)甲基化的影響，以及EBV非編碼RNA對宿主基因表達(dá)調(diào)控作用兩個方面。
　　目的：明確EBV感染對Wnt抑制因子

2、1(Wnt inhibitory factor-1，WIF1)編碼基因啟動子區(qū)甲基化以及EBV編碼miRNA BART19-3p對 WIF1表達(dá)的影響，為進(jìn)一步探討EBV抑制WIF1表達(dá)，進(jìn)而異常激活Wnt原癌基因通路參與EBVaGC發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：選取2種EBV陽性胃癌細(xì)胞系GT38、GT39和3種EBV陰性胃癌細(xì)胞系HGC-27、MKN-45、SGC7901作為研究對象，采用實(shí)時熒光定量PCR(Re

3、al time quantitative PCR，real time qPCR)檢測上述細(xì)胞系WIF1表達(dá)水平，亞硫酸氫鹽基因組測序法(Bisufite genomic sequencing，BGS)檢測WIF1基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)。并分別采用5-Aza-CdR、BART19-3p模擬物以及抑制物作用EBV陽性胃癌細(xì)胞系GT38和EBV陰性胃癌細(xì)胞系HGC-27，檢測藥物作用前后2種細(xì)胞系WIF1和β-catentin表達(dá)水平的變化以

4、及細(xì)胞增殖情況。
　　結(jié)果：①BGS檢測結(jié)果結(jié)果顯示，5種胃癌細(xì)胞系WIF1啟動子區(qū)均呈高甲基化狀態(tài)，甲基化率均在85%以上。②real time qPCR結(jié)果顯示，胃癌細(xì)胞系中WIF1表達(dá)普遍下調(diào)，以EBV陽性細(xì)胞系GT38和GT39下降更為明顯；5-Aza-CdR作用后GT38和HGC-27兩種細(xì)胞系WIF1表達(dá)均上調(diào)，其中HGC-27上調(diào)更為顯著；同時，Western Blot顯示兩種細(xì)胞系β-catenin水平均下調(diào)。③E

5、BV陰性細(xì)胞系HGC-27轉(zhuǎn)染外源性BART19-3p模擬物后，WIF1表達(dá)進(jìn)一步下調(diào)，β-catenin水平升高，細(xì)胞增殖率增加。④EBV陽性細(xì)胞GT38轉(zhuǎn)染外源性BART19-3p抑制物后，WIF1表達(dá)水平升高，β-catenin表達(dá)水平下調(diào)，細(xì)胞生長抑制率增加。
　　結(jié)論：①EBV陰性和陽性細(xì)胞系中WIF1表達(dá)水平均較低，EBV陽性細(xì)胞系中表達(dá)缺失或下調(diào)情況更為明顯，去甲基化試劑5-Aza-CdR處理可不同程度上調(diào)GT38及

6、HGC-27細(xì)胞系WIF1表達(dá)，EBV陰性細(xì)胞系HGC-27上調(diào)更為明顯。②外源性BART19-3p模擬物轉(zhuǎn)染EBV陰性細(xì)胞系HGC-27可進(jìn)一步抑制WIF1表達(dá)，抑制β-Catenin降解，促進(jìn)其積聚。提示BART19-3p可拮抗WIF1對Wnt/β-catenin信號通路的抑制作用，進(jìn)而在 EBV相關(guān)腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。③外源性BART19-3p抑制物轉(zhuǎn)染EBV陽性細(xì)胞系GT38可抑制EBV編碼的BART19-3p的作用，WI