VE-cadherin在非小細(xì)胞肺癌血管生成中的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin)是特異性表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞的一類細(xì)胞黏附分子，是血管形成過(guò)程中不可缺少的。本研究旨在探討血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)血管生成中的作用，并分析其與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)之間的相關(guān)性，為NSCLC的抗血管生成治療提供新的靶點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.VE-cadherin在NSCLC中的表達(dá)及其意義:應(yīng)用免疫組化SP法

2、檢測(cè)72例NSCLC組織及相應(yīng)癌旁正常組織VE-cadherin蛋白的表達(dá)情況;其中34例用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)mRNA的表達(dá)情況;并以VEGF為陽(yáng)性參照。
　　 2.VE-cadherin表達(dá)下調(diào)對(duì)A549細(xì)胞增殖、周期及凋亡的影響:實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、干擾組及陰性對(duì)照組，設(shè)計(jì)VE-cadherin-siRNA，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，實(shí)時(shí)定量PCR法和Western blotting法檢測(cè)VE-cadherin在各組表達(dá)量的變

3、化;MTS比色法檢測(cè)A549細(xì)胞的增殖情況;FCM檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡。
　　 3.VE-cadherin表達(dá)下調(diào)的A549細(xì)胞上清液對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)增殖、周期、凋亡及小管形成的影響:收集上述各組轉(zhuǎn)染72 h后的細(xì)胞上清液，用ELISA法檢測(cè)上清液中VE-cadherin的表達(dá)情況;并分析上清液對(duì)HUVECs增殖、周期、凋亡及Matrigel小管形成的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.72例NSCL

4、C組織癌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞VE-cadherin蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為69.4％、52.8％，均顯著高于對(duì)應(yīng)癌旁正常組織肺泡上皮細(xì)胞0％和血管內(nèi)皮細(xì)胞20.8％;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)量均顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組;Ⅲ-Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于Ⅰ-Ⅱ期。
　　 2.VEGF蛋白在NSCLC組織癌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為84.7％、62.5％，均顯著高于對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織肺泡上皮細(xì)胞16.7％和血管內(nèi)皮細(xì)胞29.2％。

5、
　　 3.經(jīng)實(shí)時(shí)定量PCR分析，VE-cadherin mRNA在癌組織和癌旁正常組織中的相對(duì)表達(dá)量分別為1.15±0.87、0.70±0.57; VEGFmRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為1.39±1.17、0.79±0.65。
　　 4.VE-cadherin和VEGF在蛋白水平和mRNA水平均呈正相關(guān)。
　　 5.干擾組VE-cadherin mRNA的表達(dá)量(0.299±0.039)明顯低于空白對(duì)照組(1.13

6、7±0.082)和陰性對(duì)照組(1.001±0.076);干擾組VE-cadherin蛋白的表達(dá)量(0.297±0.045)明顯低于空白對(duì)照組(0.833±0.119)和陰性對(duì)照組(0.794±0.095)。
　　 6.三組對(duì)A549細(xì)胞增殖、周期及凋亡的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 7.轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞72 h后，干擾組上清液VE-cadherin的表達(dá)量(2.89±0.07)ng/mL明顯低于空白對(duì)照組(11.43±0.0

7、9) ng/mL和陰性對(duì)照組(11.15±0.04)ng/mL，而后兩組間表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 8.干擾組與陰性對(duì)照組上清液對(duì)HUVECs周期各期的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 9.干擾組上清液明顯抑制了HUVECs的增殖，24 h、48 h、72 h的抑制率分別為29.2％、33.8％、30.1％。
　　 10.加干擾組上清液的HUVECs凋亡率為(27.12±5.22)％，顯著高于加陰性對(duì)照組上清液(1

8、3.43±3.50)％。
　　 11.加干擾組上清液的HUVECs小管形成數(shù)為1.53±0.31，顯著低于陰性對(duì)照組(14.53±1.51)。
　　 結(jié)論:
　　 1.VE-cadherin和VEGF在NSCLC組織癌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中均高表達(dá)，且二者的表達(dá)具有正相關(guān)，提示VE-cadherin可能在NSCLC血管生成中起重要作用，且可能與VEGF具有協(xié)同作用。
　　 2.VE-cadherin-siR

9、NA可有效抑制VE-cadherin住肺癌細(xì)胞株A549中的表達(dá)，為NSCLC抗血管生成治療提供了新的靶點(diǎn)和方法。
　　 3.VE-cadherin-siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞株后，不能影響其生物學(xué)行為，提示VE-cadherin可能不是直接作用于癌細(xì)胞，而是通過(guò)其他機(jī)制來(lái)參與NSCLC的發(fā)生發(fā)展。
　　 4.由A549細(xì)胞分泌的VE-cadherin對(duì)HUVECs有促增殖和抗凋亡的作用，而對(duì)其周期無(wú)影響，表明VE-