山楂活性組份CP聯合β-內酰胺類抗生素對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的抗菌作用.pdf

1、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是醫(yī)院感染的重要病原菌,也是引起燒傷、嚴重創(chuàng)傷后感染的最常見致病菌之一。在金黃色葡萄球菌感染中,MRSA所致的醫(yī)院感染越來越流行,尤其在ICU、和燒傷病房等,MRSA的檢出率都有明顯增高的趨勢,最高可達90％以上,成為臨床亟待解決的難題。
　　 MRSA的耐藥機制主要與其大量表達PBP2a蛋白有關,該蛋白由

2、668個氨基酸組成,分子量為76.1 kDa,其C-未端功能域(327-668 aa),具有轉肽酶(Tpase)功能,能有效促進細菌細胞壁的合成與修復,且活性不受β-內酰胺類抗生素的抑制,從而表現出耐藥性。尋找能夠消解MRSA的耐藥性來控制其感染的措施具有重要的臨床意義。
　　 目的：
　　 本研究旨在以MRSA主要耐藥蛋白PBP2a為靶點,應用生物傳感器技術及體外藥敏實驗,篩選出具有通過拮抗PBP2a活性而增強β-內酰

3、胺類抗生素抗菌作用的中藥,并對其進行分離純化,以期得到具有聯合抗菌生物活性的組份或單體化合物。
　　 方法
　　 1.以PBP2a C-末端功能域(327-668 aa)為靶點,利用生物傳感器技術篩選與PBP2a具有特異性結合力的中藥;
　　 2.通過體外藥敏實驗,篩選具有聯合β-內酰胺類抗生素-苯唑西林發(fā)揮協(xié)同抗菌作用的中藥;
　　 3.對于篩選到的藥物,以聯合苯嘩西林的抗菌活性為追蹤,進行成分的分離純

4、化,制備活性組份或活性單體化合物;
　　 4.通過體外藥敏實驗,評價分離制備的活性組份或單體化合物與多種β-內酰胺類抗生素的聯合抗菌活性。
　　 結果：
　　 1.在對78種中藥進行PBP2a C-未端的生物傳感器結合實驗中,我們發(fā)現雷公藤、山楂、魚腥草、赤芍、側柏葉、黃連、藏青果、石榴皮、大黃等9種中藥具有高于200RU的PBP2a C-末端特異性結合力;
　　 2.體外藥敏實驗證實,在78種中藥中,山

5、楂、石榴皮、丁香、兒茶等4種與苯唑西林的部分抑菌指數值(FIC)小于1,具有聯合抑菌作用。在這4種藥物中,山楂與PBP2a的特異結合值最高,為365.22RU。因此,將山楂為作為下步研究對象,進行活性成分的分離提取。
　　 3.對山楂進行75％乙醇水提取,經萃取、大孔樹脂柱色譜、硅膠柱色譜進行成分分離,獲得具有明顯增強苯唑西林抗MRSA活性的組份CP;4.通過與苯唑西林、舒氨西林、氨芐西林、頭孢唑林等4種抗生素的聯合藥敏試驗,進

6、一步證實CP組份與四種抗生素對MRSA的部分抑菌指數值(FIC)分別為0.31、0.37、0.31、0.26,提示CP組份具有對β-內酰胺類抗生素的抗菌增敏作用。
　　 結論：
　　 本研究通過生物傳感器實驗和體外藥敏實驗,篩選到與PBP2a具有較高特異性結合力,且具有聯合β-內酰胺類抗生素抑制MRSA作用的藥物山楂;以體外聯合藥敏實驗作為活性追蹤,對山楂組份進行系統(tǒng)分離提取,從中獲得具有較強的聯合抗菌活性的CP組分;并