中藥對黑素合成及其相關(guān)基因表達的影響.pdf

1、背景與目的:本研究用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法對文獻記載的治療白癜風(fēng)的中藥進行發(fā)掘。從色素生成的關(guān)鍵酶——酪氨酸酶入手，用離體酶學(xué)方法從常用于治療白癜風(fēng)的中藥中篩選出對酪氨酸酶有激活作用的中藥，并對所篩選出的藥物進行致色素作用的動物實驗，以找出在活體中能促進皮膚色素生成和黑色素細胞增生的中藥，又以培養(yǎng)的小鼠B16黑色素瘤細胞為實驗?zāi)Ｐ停^察在動物實驗中增強黑色素生成的中藥對黑色素細胞的細胞增殖、黑色素合成和酪氨酸酶活性的影響。再通過中藥對酪氨酸酶蛋白

2、表達、酪氨酸酶及相關(guān)蛋白基因表達的影響，進一步研究中藥致色素作用的機理。這些實驗的結(jié)果可提供臨床治療時優(yōu)選用藥的依據(jù)，通過對提取物中有效成分的研究還有可能從中藥中開發(fā)出增強黑色素生成的新藥，在將來用于白癜風(fēng)的治療。 材料和方法:棕黃色豚鼠選自大連醫(yī)科大學(xué)動物室，小鼠B16黑素瘤細胞由中國科學(xué)院上海細胞研究所提供。本研究基于體外氧化蘑菇酪氨酸酶測定酶活性和酶動力學(xué)，結(jié)合組織化學(xué)方法，采用組織切片HE染色，觀察組織學(xué)變化，Lilli

3、e氏改良鐵反應(yīng)法，計數(shù)黑素細胞顆粒，及Dopa-氧化酶染色，計算每100個基底細胞中Dopa陽性細胞數(shù)。通過培養(yǎng)的B16黑素瘤細胞用MTT法測定細胞的增殖活性，氧化L-Dopa法測定細胞酪氨酸酶活力，NAOH法測定黑素生成量，免疫組織化學(xué)方法測定酪氨酸酶蛋白的表達量，以及采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)測定黑素合成相關(guān)基因表達的影響。 結(jié)論一.臨床常用于治療白癜風(fēng)的中藥近半數(shù)在體外對黑色素生成的關(guān)鍵酶-酪氨酸酶有激活作用，提示可能是中

4、藥治療白癜風(fēng)的一種作用機制。 二.多種中藥乙醇提取物對酪氨酸酶激活的酶動力學(xué)型類不同于已知黑色素生成促進劑補骨脂素，提示其含有與補骨脂素不同的有效成分，具有開發(fā)前景。三.酶學(xué)實驗中顯示對酪氨酸酶有激活作用的中藥大多能增強棕色豚鼠皮膚的黑色素生成，說明酶學(xué)篩選是有意義的，但不能代替活體實驗。 3四.在離體實驗?zāi)茉黾永野彼崦富钚院驮诨铙w實驗?zāi)茉鰪姾谏厣傻闹兴幙蛇x用于白癜風(fēng)的臨床治療。 五.旱蓮草等6種中藥能增強B

5、16黑色素瘤細胞黑色素生成，對細胞增殖、黑色素含量和酪氨酸酶活性均有作用。鑒于B16細胞在黑色素生成的研究領(lǐng)域中具有替代人類黑色素細胞的價值，上述中藥的臨床應(yīng)用價值和開發(fā)前景更值得重視。 六.旱蓮草等3種中藥能增加酪氨酸酶蛋白在B16細胞中的表達，說明其可能通過增加酶蛋白的表達量來促進黑素合成。RT-PCR結(jié)果顯示旱蓮草等4種中藥能上調(diào)酪氨酸酶的mRNA，苦參能上調(diào)TPR-2的mRNA，說明它們的作用機制在調(diào)節(jié)黑色素生成相關(guān)基因