定量緩釋rhBMP-2、rbFGF促進兔下頜牽張成骨的實驗研究.pdf

1、本實驗在研究兔下頜牽張成骨過程中BMP-2和bFGF的時空表達的基礎(chǔ)上，應(yīng)用外源性rhBMP-2和rbFGF定量緩釋來促進牽張成骨中新骨的成骨速度和質(zhì)量。 第一部分：通過免疫組織化學方法觀察BMP-2、bFGF在兔下頜骨牽張成骨中的時空表達。 研究材料與方法：將12只新西蘭大白兔分為牽張成骨組和部分下頜骨缺損組。其中牽張成骨組8只，部分下頜骨缺損組4只，實驗組安置口外牽張器，經(jīng)7天間歇期后，按0.5mm/12h的速率延長

2、下頜骨6mm。在牽張期第1天、第6天、固定期第7天和第28天分別處死牽張成骨組動物2只和部分骨缺損組動物1只，取牽張區(qū)及骨缺損區(qū)骨痂用免疫組化方法檢測不同時間內(nèi)BMP-2、bFGF表達水平的變化。 研究結(jié)果：下頜骨牽張后BMP-2和bFGF表達增強，其陽性信號主要定位于間充質(zhì)細胞和新生骨小梁邊緣的成骨細胞。結(jié)果表明BMP-2和bFGF的陽性信號在牽張期和固定期早期較間歇期和固定期后期表達更強烈。 研究結(jié)論：實驗結(jié)果表明在

3、牽張成骨中bFGF和BMP-2是局部調(diào)整的角色。壓力刺激成骨細胞和其他類型細胞分泌bFGF和BMP-2。這兩種因子在牽張期及固定期早期起重要作用，能誘導間充質(zhì)細胞分化為成骨細胞。 第二部分：采用溶劑揮發(fā)法制備rbFGF/PLGA植入片，探討rbFGF/PLGA植入片定量緩釋情況及其對兔下頜牽張成骨促進成骨的作用。 研究材料與方法：18只新西蘭大白兔隨機分為兩組，每組9只，建立兔下頜雙側(cè)牽張成骨動物模型。通過溶劑揮發(fā)法制備

4、rbFGF/PLGA植入片，并植入實驗組，對照組植入空白PLGA。所有動物采用標準的牽張方式(間歇期7天，牽張速率0.5mm/12h，共牽張6天)，在固定期第1周、第3周、第6周分別處死兩組動物各3只，取材，對標本進行組織學、影像學、生物力學檢查，并進行ALP活性測定及骨鈣素含量測定評估新生骨質(zhì)量。 研究結(jié)果：rbFGF/PLGA植入片表面光滑圓整，均勻度好，體外具有定量緩釋作用。兔下頜骨延長后牽張間隙均有新骨形成，實驗組新生骨

5、組織比對照組更為成熟，新生骨形成速度和骨小梁密度均優(yōu)于對照組。 研究結(jié)論：rbFGF/PLGA植入片制備工藝良好，植入片中rbFGF生物活性保存良好，體外具有定量緩釋作用，能明顯促進兔下頜牽張成骨質(zhì)量。 第三部分：制備可以定量緩釋的rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯納米微粒緩釋劑，考察其一般性質(zhì)和體外釋藥特性。研究局部使用緩釋rhBMP-2納米微粒對兔下頜牽張成骨中促進成骨的作用。 研究材料與方法：采用乳化溶液聚合

6、法制備rhBMP-2納米微粒，18只新西蘭大白兔隨機分為兩組，每組9只，建立兔下頜雙側(cè)牽張成骨動物模型。以0.5mm/12h的速率牽張共延長兔下頜骨6mm。于牽張期開始連續(xù)10天于牽張間隙注射rhBMP-2納米微粒，對照組分別注射等量不含rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯乳液。固定期第1周，第3周，第6周分別處死兩組動物各3只，檢測血清骨鈣素含量和ALP活性，取材后進行影像學、組織形態(tài)學觀察，取下頜新骨進行生物力學和骨礦物密度(BMD)檢

7、測。 研究結(jié)果：電鏡觀察表明rhBMP-2納米微粒形態(tài)規(guī)整，rhBMP-2的包封率為78％，體外緩釋試驗表明納米微粒中rhBMP-2至少可以維持十天以上。應(yīng)用rhBMP-2納米微粒組的新骨形成速度、質(zhì)量及骨小梁的密度均高于對照組。 研究結(jié)論：采用聚氰基丙烯酸正丁酯制得rhBMP-2納米微粒具有確定的緩釋作用，能夠有效維持rhBMP-2濃度，在體內(nèi)外可以延長rhBMP-2的作用時間，可作為注射性骨誘導制劑。局部應(yīng)用rhBM