塞來昔布對人結(jié)腸癌裸鼠種植瘤COX-2及Survivin表達的影響.pdf

1、目的：環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)是一種誘導型酶，可以通過促進細胞增殖、抑制細胞凋亡、促進血管發(fā)生、誘導腫瘤細胞的侵襲力等多種途徑參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。Survivin是近來發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白(inhibitor ofapoptosis protein,IAP)家族成員之一，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子。Survivin在終末分化的成人組織(胸腺和生殖腺除外)中檢測不到，而在大多數(shù)腫瘤組織中有不同程

2、度的表達。 近年來結(jié)腸癌的發(fā)病率不斷上升，在全世界范圍內(nèi)威脅著人類的健康和生命，而人類80％以上的結(jié)腸癌都過表達COX-2。已有動物實驗表明，傳統(tǒng)的非甾體類抗炎藥(NSAIDs)或選擇性COX-2抑制劑可抑制遺傳的及化學誘導的結(jié)腸腫瘤的生長，所以探索選擇性COX-2抑制劑預防和治療人類結(jié)直腸癌的可能作用機制將有重要意義。 本實驗通過建立人結(jié)腸癌裸鼠皮下種植瘤模型，以選擇性COX-2抑制劑塞來昔布(celecoxib)對人

3、結(jié)腸癌裸鼠皮下種植瘤模型進行干預治療，研究塞來昔布對人結(jié)腸癌裸鼠種植瘤COX-2及Survivin表達的影響。 方法：選取4～5周齡、體重20～24g BALB/c雌性裸鼠12只，取處于對數(shù)生長期的人結(jié)腸癌HT-29細胞制成單細胞懸液(細胞密度為1×107/ml)接種與裸鼠頸背部皮下，每只0.2ml。接種完畢后，所有裸鼠于SPF條件的層流架中繼續(xù)飼養(yǎng)。定期觀察裸鼠生長情況及成瘤情況，并用游標卡尺測量腫瘤的長徑(a)、短徑(b)，

4、按公式“V=ab2/2”估算腫瘤體積。待腫瘤中位體積約100mm3(16天)后，將所有裸鼠隨機分為對照組和塞來昔布組，每組6只。塞來昔布采用灌胃方式給藥，劑量為40mg/kg，對照組喂以同體積的蒸餾水。連續(xù)用藥30天，最后一次給藥24小時后，測量腫瘤體積，以頸椎脫位方式處死裸鼠，連同包膜完整剝出腫瘤組織，部分腫瘤組織置于4％多聚甲醛溶液中固定后，用免疫組織化學染色檢測COX-2表達，COX-2陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，位于細胞質(zhì)中，細胞漿及

5、細胞核周圍呈棕黃色者判為陽性。先在低倍鏡下對組織切片全面觀察，隨后于200倍光鏡下，隨機觀察10個視野，以病理圖像分析系統(tǒng)計算平均積分光密度值；部分腫瘤組織迅速裝于凍存管中，置于液氮中保存用于Westernblot檢測Survivin表達。 數(shù)據(jù)以mean±s表示，應用SPSS 12.0統(tǒng)計學軟件進行成組t檢驗統(tǒng)計分析，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果：1對COX-2免疫組織化學染色切片進行積分光密度測定，對照組和塞

6、來昔布組的積分光密度值分別為15091.38±896.46和7862.12±847.72，t檢驗結(jié)果顯示，與對照組比較，塞來昔布組COX-2表達水平明顯降低(P＜0.001)。 2對照組和塞來昔布組均可見Survivin蛋白表達，與對照組相比，塞來昔布組Surivin的表達明顯減弱。 結(jié)論：1 塞來昔布可以抑制裸鼠人結(jié)腸癌種植瘤COX-2和Survivin的表達。 2.COX-2可能通過促進Survivin的表達