干擾TGF-βⅡ型受體表達(dá)對NB4細(xì)胞增殖及其對ATRA、ATO反應(yīng)的作用.pdf

1、目的：研究干擾TGF-βⅡ型受體穩(wěn)定表達(dá)對NB4細(xì)胞的增殖能力，及其對ATRA和ATO誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分化和凋亡反應(yīng)的作用。
　　方法：1、運(yùn)用RNAi技術(shù)設(shè)計(jì)并構(gòu)建四個慢病毒載體，篩選鑒定出有效LV-TGFBR2-RNAi(9759-1)慢病毒載體并對其進(jìn)行包裝，轉(zhuǎn)染NB4細(xì)胞，用抗性篩選法獲得穩(wěn)定表達(dá)干擾TβRⅡ基因的NB4細(xì)胞，命名為TβRⅡ-shRNA NB4細(xì)胞；采用RT-qPCR方法鑒定TβRⅡ基因在NB4細(xì)胞的具體表達(dá)

2、。2、通過臺盼藍(lán)拒染及CCK-8法了解NB4細(xì)胞及TβRⅡ-shRNA NB4細(xì)胞的增殖。3、通過流式CD11b檢測和瑞氏染色，觀察維甲酸對TβRⅡ-shRNA NB4細(xì)胞及NB4細(xì)胞分化過程的具體影響。4、通過Anne xinV-FITC/PI-雙熒光標(biāo)記法及 AO/EB染色研究亞砷酸對TβRⅡ-shRNA NB4細(xì)胞及NB4細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：1、RT-qPCR方法證實(shí)TβRⅡ在NB4細(xì)胞中穩(wěn)定干擾。
　　2、臺

3、盼藍(lán)拒染法及CCK-8法發(fā)現(xiàn)TβRⅡ-shRNA NB4細(xì)胞的增殖活性高于NB4細(xì)胞，96h后TβRⅡ-shRNA NB4細(xì)胞和NB4細(xì)胞的OD值分別是1.859±0.029、1.096±0.006（P<0.0001）。
　　3、維甲酸應(yīng)用過程中，上述兩種細(xì)胞都出現(xiàn)相應(yīng)的細(xì)胞分化現(xiàn)象（瑞氏染色）。TβRⅡ-shRNA NB4細(xì)胞表面的CD11b抗原表達(dá)量顯著低于NB4細(xì)胞，呈劑量依賴性。0.1μM孵育TβRⅡ-shRNA NB4細(xì)

4、胞和NB4細(xì)胞96h，CD11b表達(dá)率分別為79.133±0.85、89.333±0.55（P<0.0001）。
　　4、上述兩種細(xì)胞，經(jīng)2μM的亞砷酸進(jìn)行24h的孵育后，均出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象（AO/EB染色）。TβRⅡ-shRNA NB4細(xì)胞凋亡率顯著低于NB4細(xì)胞，呈劑量依賴性。8μM孵育TβRⅡ-shRNA NB4細(xì)胞和NB4細(xì)胞24h，凋亡率分別是49.15±2.05、66.85±2.41（P<0.01）。
　　結(jié)論：研究