冬蟲夏草提取物對(duì)大鼠慢性肝損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:本課題旨在研究TGF-β1/Smad通路在慢性肝損傷過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化及冬蟲夏草提取物（Cordyceps mycelia extracts，CME）對(duì)慢性肝病中TGF-β1/Smad通路及肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellatecells，HSC)的影響。
　　方法:
　　1.168只SD雄性大鼠分為4組:對(duì)照組，模型組，CME組，溶媒組。模型組給予10mg/kg二乙基亞硝胺灌胃（5次/周）至14周，15-16周不

2、做處理;對(duì)照組給予與模型組相同容量的生理鹽水至14周，15-16周不做處理;CME組給予與模型組相同的處理并在4周末開始給予80mg/kg CME至16周;溶媒組給予與模型組相同的處理并在4周末開始給予與CME相同容量的溶媒至16周。
　　2.分別在肝炎、肝纖維化、肝硬化及肝癌階段處死大鼠，取肝組織進(jìn)行HE及Masson染色鑒定肝損傷模型是否成功，眼眶取血測(cè)定肝功能指標(biāo)ALT及AST含量。
　　3.改良Nycodenz法分離

3、原代大鼠HSC，并提取肝組織及HSC總RNA及總蛋白，RT-PCR及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法分別檢測(cè)肝組織與HSC中α-SMA，TGF-β1，Smad3，Smad7 mRNA表達(dá)，Western Blot檢測(cè)肝組織中Smad3，Smad7蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.肝組織HE，Masson染色Scheuer法評(píng)分結(jié)果均示造模4，8，12，16周肝臟分別處于肝炎階段，肝纖維化階段，肝硬化階段，早期肝癌階段;細(xì)胞免疫組化法

4、測(cè)定HSC標(biāo)志物α-SMA呈陽(yáng)性，熒光顯微鏡下觀察HSC其可發(fā)出易淬滅的藍(lán)綠色熒光，純度達(dá)90％以上。
　　2.模型組中肝組織及HSC中α-SMA，TGF-β1，Smad3，Smad7表達(dá)均呈動(dòng)態(tài)變化。
　　(1)肝組織及HSC中α-SMA mRNA在造模4，8，12，16周表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組，肝組織α-SMA mRNA表達(dá)量在12、16周表達(dá)最高，HSC中α-SMA mRNA表達(dá)量在12周最高。
　　(2)肝組織

5、與HSC中TGF-β1 mRNA表達(dá)不一致:肝組織TGF-β1在造模4，8，12周表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組，且在第8周表達(dá)最高，但在造模16周TGF-β1表達(dá)量與對(duì)照組無(wú)顯著差異，并顯著低于12周模型組;HSC中TGF-β1表達(dá)量在造模4，8，12，16周均顯著高于對(duì)照組，且在8周表達(dá)最高。
　　(3)肝組織與HSC中Smad3表達(dá)趨勢(shì)基本一致:肝組織Smad3mRNA及蛋白表達(dá)量在造模4，8，12周均顯著高于對(duì)照組，在第8周最高;

6、然而肝組織Smad3 mRNA及蛋白在16周表達(dá)不一致:Smad3mRNA表達(dá)在16周顯著高于對(duì)照組，而Smad3蛋白在16周表達(dá)量與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異;HSC中Smad3 mRNA表達(dá)在造模4，8，16周均顯著高于對(duì)照組，但在造模12周與對(duì)照組無(wú)顯著差異。
　　(4)肝組織與HSC中Smad7mRNA及蛋白表達(dá)在造模4，8，12周表達(dá)一致，與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，但在造模16周肝組織Smad7mRNA及蛋白顯著高于對(duì)照組，而H

7、SC中Smad7mRNA表達(dá)顯著低于對(duì)照組。
　　3.CME可顯著延緩大鼠慢性肝損傷的發(fā)展進(jìn)程。
　　(1)各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均顯示溶媒組與模型組無(wú)顯著差異。
　　(2) CME組中ALT及AST水平顯著低于模型組，HE染色及Masson染色評(píng)分證實(shí)CME在各時(shí)間點(diǎn)肝臟的炎癥活動(dòng)度，膠原沉積度和肝細(xì)胞損傷程度均比同期模型組低。
　　(3)與模型組相比較，CME可在8周末降低肝組織中α-SMA，TGF-β1，Smad3及

8、HSC中α-SMA，Smad3的表達(dá)，同時(shí)可上調(diào)肝組織及HSC中Smad7的表達(dá)。CME可在12周末降低肝組織中α-SMA，TGF-β1，Smad3及HSC中α-SMA的表達(dá)。CME可在16周末降低肝組織α-SMA的表達(dá)，并上調(diào)HSC中Smad7的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.HSC中TGF-β1，Smad3表達(dá)升高及Smad7低表達(dá)水平可能與HSC的激活相關(guān);肝組織中TGF-β1、 Smad3表達(dá)升高，Smad7低表達(dá)水平及