膨化人參的生物學(xué)作用評(píng)價(jià).pdf

1、目的：
　　膨化人參是以生曬參為原料，利用雙螺桿擠壓技術(shù)加工所得的新產(chǎn)品。因膨化人參系人參的新工藝制品，所以關(guān)于其成分的變化以及生物學(xué)效應(yīng)研究甚少。本研究在探討膨化人參的急性毒理學(xué)作用后，觀察了對(duì)嚙齒類小動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)、運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)的影響，利用常溫常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)、負(fù)重游泳力竭實(shí)驗(yàn)、在體骨骼肌收縮力學(xué)實(shí)驗(yàn)、骨骼生物力學(xué)實(shí)驗(yàn)和血清學(xué)檢查，初步對(duì)膨化人參的部分生物學(xué)作用做了一些研究。本研究將為膨化人參的廣泛應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也

2、為膨化人參的進(jìn)一步研究提供新思路。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)對(duì)象系Spreague-Dawley清潔級(jí)雄性大鼠和昆明小鼠。
　　1.急性毒性實(shí)驗(yàn)：在探討膨化人參的急性毒性實(shí)驗(yàn)后，摸索了最大給藥量。大鼠18只，隨機(jī)分為2組（對(duì)照組，膨化人參組）。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食不禁水16h，灌胃后禁食不禁水4h。1d內(nèi)分3次分別給予最大濃度（0.15g/ml），最大胃容量（4ml/100g)的膨化人參懸浮液，兩次灌胃間隔6h。
　　2.

3、學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)：32只大鼠隨機(jī)分為膨化人參高、中、低劑量組和對(duì)照組，每組各8只。各給藥組給予相應(yīng)劑量（3g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg）膨化人參懸浮液，對(duì)照組給予等容量蒸餾水，1d一次連續(xù)灌胃21d。利用Miorris水迷宮進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索能力實(shí)驗(yàn)。
　　3.負(fù)重游泳力竭實(shí)驗(yàn)：將32只大鼠隨機(jī)分成4組，每組8只，連續(xù)灌胃21d。膨化人參組分高、中、低劑量3個(gè)組灌胃膨化人參懸浮液（3g/kg、1.5g/kg、0.

4、75g/kg），對(duì)照組給予等容量蒸餾水。灌胃結(jié)束后，在大鼠尾部1/3-2/3處負(fù)重游泳，觀察并記錄入水后到沉入水下10s不能浮出水面的時(shí)間即游泳力竭時(shí)間。
　　4.骨骼肌在體收縮力學(xué)實(shí)驗(yàn)：取16只大鼠隨機(jī)分成藥物組和對(duì)照組，分別灌胃1.5g/kg的膨化人參懸浮液和等容量蒸餾水，每天一次連續(xù)灌胃21d。應(yīng)用電生理學(xué)方法，觀察電刺激大鼠在體坐骨神經(jīng)對(duì)腓腸肌和比目魚(yú)肌單收縮的潛伏期、最大收縮幅度和1/2最大舒張幅度和強(qiáng)直收縮的潛伏期、最

5、大收縮幅度。
　　5.骨骼實(shí)驗(yàn)：SD大鼠32只，分成膨化人參高、中、低劑量組和對(duì)照組。灌胃3g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg的膨化人參懸浮液和等容量蒸餾水，每天一次連續(xù)灌胃21d。部分實(shí)驗(yàn)中只設(shè)最佳給藥劑量組和對(duì)照組。待灌胃結(jié)束第2d，手術(shù)取材。
　?、俟趋郎L(zhǎng)指標(biāo)：測(cè)量股骨長(zhǎng)度、直徑、股骨/體重比、表觀骨密度。
　?、诠晒堑纳锪W(xué)實(shí)驗(yàn)：用 CSS-44100型電子萬(wàn)能試驗(yàn)機(jī)（長(zhǎng)春試驗(yàn)機(jī)研究所有限公司中國(guó)）

6、，（載荷量程為1000N，分辨力為0.01N，橫梁位移分辨力為0.001mm）將-20℃保存的大鼠股骨常溫解凍，生理鹽水復(fù)濕，進(jìn)行三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)?？缇?0mm，加載速度5mm/min，通過(guò)得到的測(cè)試曲線測(cè)量并計(jì)算出股骨的最大彎曲應(yīng)力、彎曲能量、彎曲彈性模量和彎曲韌性系數(shù)等生物力學(xué)參數(shù)。
　　6.常溫常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)：將32只昆明小鼠隨機(jī)分為膨化人參高、中、低劑量組和對(duì)照組，每組8只。分別灌胃膨化人參懸濁液（1.5g/kg、0.75g/

7、kg、0.375g/kg）和蒸餾水。連續(xù)灌胃3w后，利用恒壓缺氧系統(tǒng)，觀察耐缺氧時(shí)間以及耗氧量。
　　7.血液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)：將實(shí)驗(yàn)6的動(dòng)物灌胃結(jié)束后，開(kāi)胸心臟采血，利用血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)板在20倍光學(xué)顯微鏡下統(tǒng)計(jì)小鼠血紅細(xì)胞數(shù)量。
　　8.血液生化指標(biāo)測(cè)定：
　?、倏寡趸笜?biāo)：利用促凝真空采血管心臟采血，分離血清，利用酶聯(lián)法檢測(cè)SOD活性、MDA含量。
　?、诔晒巧L(zhǎng)肽、骨鈣素：采血同抗氧化指標(biāo)測(cè)定，利用酶聯(lián)免疫法測(cè)定。

8、
　?、垩}、血磷、堿性磷酸酶：利用促凝真空采血管心臟采血，分離血清，利用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。
　　9.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Mean± SE表示。進(jìn)行單因素和雙因素方差分析和t檢驗(yàn)，設(shè)定P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.最大耐受量：無(wú)法測(cè)定膨化人參的半數(shù)致死量。在探討最大耐受量時(shí)，大鼠呼吸、進(jìn)食、體毛、口鼻分泌物、狀態(tài)及體重均未見(jiàn)明顯異常，并且沒(méi)有發(fā)

9、生動(dòng)物的死亡。膨化人參的最大給藥量是0.15g/ml×40ml/kg×3次=18g/kg，是成人每日人參最大常用量9g/60kg的120倍。
　　2.動(dòng)物大體病理學(xué)改變：各組大鼠一般狀態(tài)均良好。除了膨化人參大劑量組動(dòng)物進(jìn)食量減少以外其他各組動(dòng)物均無(wú)異常。大體病理學(xué)檢查也未發(fā)現(xiàn)明顯異常。
　　3.動(dòng)物的一般狀態(tài)：灌胃期間大鼠體重普遍增長(zhǎng)。其中中劑量大鼠體重增長(zhǎng)最大，但與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異，而高劑量組大鼠與對(duì)照組相比體重增加率

10、（體重增長(zhǎng)率=體重增加量/體重）明顯減少（P<0.05）。
　　4.血清SOD和MDA的影響：膨化人參增加大鼠血清SOD的活性，降低MDA的含量。與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5.學(xué)習(xí)記憶能力的影響：
　?、俣楹叫心芰Φ挠绊懀旱?和第2d的定位航行試驗(yàn)中動(dòng)物尋找站臺(tái)的時(shí)間，即尋找站臺(tái)潛伏期各組之間無(wú)顯著性差異。但是之后的連續(xù)三天內(nèi)，中劑量大鼠和高劑量組大鼠的尋找站臺(tái)潛伏期與對(duì)照組相比明顯縮短（P＜

11、0.05）。
　　②空間探索能力的影響：撤離站臺(tái)后，膨化人參的中劑量組動(dòng)物穿越站臺(tái)的次數(shù)明顯增多（P＜0.05）。
　　6.對(duì)耐缺氧能力的影響：
　?、偎劳鰰r(shí)間：膨化人參大劑量組小鼠耐缺氧時(shí)間由對(duì)照組的19.48±0.58 min增加到23.70±0.62min，具有顯著性差異（P＜0.05）。
　?、诤难趿浚簩?shí)驗(yàn)組動(dòng)物的耗氧量均有增加的趨勢(shì)，其中大劑量組的耗氧量（27.73±0.23ml）明顯高于對(duì)照組（25.

12、06±0.18ml），P值小于0.05。
　?、奂t細(xì)胞數(shù)：高劑量膨化人參對(duì)紅細(xì)胞的影響很明顯，由正常動(dòng)物的8.12±0.31x1012增加到11.93±0.34x1012（P＜0.05）。
　　7.對(duì)骨骼肌收縮能力的影響：
　　①對(duì)骨骼肌重量的影響：實(shí)驗(yàn)用測(cè)定心肌和腓腸肌干重/濕重百分比的方法，觀察了膨化人參對(duì)骨骼肌和心臟重量的影響，但是均未見(jiàn)明顯差異（P＞0.05）。
　?、谟斡玖吣芰Φ挠绊懀号蚧藚⒅袆┝拷M

13、大鼠游泳力竭時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組（P＜0.05）。
　?、墼隗w骨骼肌收縮能力的影響：膨化人參能使大鼠腓腸肌和比目魚(yú)肌的單收縮和強(qiáng)直收縮的潛伏期縮短，最大收縮幅度顯著增加，同時(shí)強(qiáng)直收縮的1/2舒張時(shí)間明顯延長(zhǎng)，與對(duì)照組比較其差異均顯著（P＜0.05)。
　　8.對(duì)股骨生長(zhǎng)和力學(xué)效應(yīng)的影響：
　?、俟晒巧L(zhǎng)的影響：膨化人參高、中、低3個(gè)劑量組動(dòng)物的股骨(mg)/體重(g)比均有增加傾向。分別為2.44±0.06、2.37±0

14、.05、2.33±0.05，與對(duì)照組（2.18±0.03）比較，高、中兩個(gè)劑量組的P值小于0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。接著選擇效果明顯的中劑量組，觀察了大鼠股骨長(zhǎng)度、直徑、體積和骨密度的變化。發(fā)現(xiàn)，除了骨密度以外其他各項(xiàng)指標(biāo)均大于對(duì)照大鼠（P＜0.05）。另外，雖然膨化人參組股骨的密度與對(duì)照組相比沒(méi)有明顯的差異（P>0.05），但是卻有提高趨勢(shì)。
　?、诠晒巧锪W(xué)效應(yīng)的影響：利用材料力學(xué)研究方法，通過(guò)三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)探討了股骨的生物力

15、學(xué)指標(biāo)的變化。發(fā)現(xiàn)，膨化人參中劑量組大鼠股骨最大彎曲應(yīng)力、彎曲彈性模量、彎曲能量、和彎曲韌性系數(shù)均大于對(duì)照組大鼠（P＜0.05）。提示，中劑量膨化紅參明顯提高大鼠股骨生物力學(xué)抗壓韌性。
　?、蹖?duì)血鈣、血磷和堿性磷酸酶的影響：膨化人參組的各項(xiàng)指標(biāo)均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。
　?、軐?duì)成骨生長(zhǎng)肽（OGP）和骨鈣素（BGP）的影響：膨化人參組動(dòng)物血液中OGP和BGP明顯高于對(duì)照組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)