巨細(xì)胞病毒感染合并肝損傷與乙肝疫苗免疫應(yīng)答效果相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 由于巨細(xì)胞病毒感染可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能下降，因此我們通過臨床與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)共同研究探討圍生期與先天性巨細(xì)胞病毒感染合并肝臟損傷對(duì)乙肝疫苗免疫應(yīng)答效果的影響及其發(fā)生機(jī)制。
　　 方法：
　　 臨床實(shí)驗(yàn)方法
　　 選取我院巨細(xì)胞病毒感染患兒41例，平均年齡1月，所有患兒均于生后24小時(shí)內(nèi)接種乙肝疫苗。抽取空腹靜脈血檢測(cè)血清肝功生化;檢測(cè)結(jié)果有異常者歸為A組，即巨細(xì)胞病毒感染合并肝損傷組，共20例。檢查

2、結(jié)果無明顯異常者歸為B組，即巨細(xì)胞病毒感染無肝損傷組，共19例。選取健康小嬰兒，歸為C組，即正常對(duì)照組，共20例。應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HCMV-IgM抗體及抗HBsAb滴度，熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞HCMV-DNA;流式分析技術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞群。
　　 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法
　　 取8-9周齡雌性SPF級(jí)大鼠30只，見栓孕鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組20只，對(duì)照組10只，于見栓后第2-5天分別腹腔內(nèi)接種HCM

3、V-AD169株病毒懸液0.1ml/只(6.0logTCID50/ml)，對(duì)照組腹腔內(nèi)接種等量的人胚肺細(xì)胞上清液，待其分娩后，所有新生鼠于生后24小時(shí)內(nèi)雙后肢肌內(nèi)接種乙肝疫苗，5μg/只。所有幼鼠于生后三周處死，收集血清檢測(cè)HCMV-IgM和肝功生化指標(biāo)，留取肝臟做病理切片行HE染色。HCMV-IgM陽性、肝功生化結(jié)果或（和）肝臟HE染色結(jié)果異常者歸為A組，即巨細(xì)胞病毒感染合并肝損傷組，共81只;HCMV-IgM陽性、肝功生化結(jié)果和肝臟

4、HE染色結(jié)果均無異常者歸為B組，即巨細(xì)胞病毒感染無肝損傷組，共81只;正常對(duì)照組歸為C組，共83只。應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)血清中抗HBsAb滴度、血清及肝組織中IL-2、IL-6的水平。
　　 結(jié)果：
　　 臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1.抗HBsAb滴度:A組:抗HBsAb滴度最低，檢測(cè)值為3.01±4.05mIU/ml，與B組及C組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，B組:抗HBsAb滴度為220.45±3.17mI

5、U/ml，與C組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）;C組:抗HBsAb滴度最高，檢測(cè)值為223.34±3.73mIU/ml。
　　 2.細(xì)胞免疫功能指標(biāo):A組:CD3+、CD4+、CD19+、NK細(xì)胞含量降低，CD8+細(xì)胞含量升高，CD4/CD8比值下降，與B組及C組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，B組與C組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1.抗HBsAb滴度:A組:抗HBsAb

6、滴度最低，檢測(cè)值為0.47±0.09U/ml，與B組及C組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);B組:抗HBsAb滴度介于A組與C組之間，檢測(cè)值為0.70±0.07U/ml，與C組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05），C組:抗HBsAb滴度最高，檢測(cè)值為0.73±0.09U/ml。
　　 2.血清IL-2和IL-6的水平:A組:血清IL-2的水平最低，檢測(cè)值為14.51±8.07ug/l，IL-6的水平最高，檢測(cè)值為7.25±3.7

7、7ng/l，與B組及C組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);B組:血清IL-2和IL-6的水平介于A組及C組之間，檢測(cè)值為18.78±8.00ug/l和2.88±1.26ng/l，與C相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);C組:血清IL-2的水平最高，檢測(cè)值為19.14±6.09ug/l，IL-6的水平最低，檢測(cè)值為2.69±0.46ng/l。
　　 3.肝組織IL-2和IL-6的水平:A組:肝組織中IL-2的水平最低，檢測(cè)值為1

8、2.64±7.36ug/l，IL-6的水平最高，檢測(cè)值為5.24±2.86ng/l，與B組及C組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);B組:肝組織中IL-2和IL-6的水平介于A組及C組之間，檢測(cè)值為15.45±6.10ug/l和3.05±2.76ng/l，與C組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);C組:肝組織中IL-2的水平最高，檢測(cè)值為16.14±7.48ug/l，IL-6的水平最低，檢測(cè)值為3.88±0.84ng/l。
　　

9、 4.HE染色結(jié)果:A組:HE染色可見肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝索解離，肝細(xì)胞腫脹、變性，肝細(xì)胞間可見淋巴細(xì)胞浸潤，肝竇內(nèi)明顯充血。B組和C組:HE染色可見肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞無腫脹及變性，未見淋巴細(xì)胞浸潤，肝竇無充血。
　　 結(jié)論：
　　 1.巨細(xì)胞病毒感染合并肝損傷可導(dǎo)致機(jī)體對(duì)乙肝疫苗免疫應(yīng)答效果的降低;
　　 2.巨細(xì)胞病毒感染合并肝損傷導(dǎo)致外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量異常，引起免疫功能紊亂;
　　 3.先天性