小鼠肝泡型包蟲病中miRNAs表達譜的初步篩選及miR-106b-25基因簇的表達和意義.pdf

1、目的：初步篩選泡球蚴感染宿主肝臟中miRNAs的表達譜并探討miR-106b-25基因簇在肝泡型包蟲病中的表達及意義。
　　方法：取雌性Balb/c小鼠隨機分為實驗組、對照組和正常組，實驗組小鼠腹腔注射泡球蚴，對照組腹腔注射等容量生理鹽水，正常組不作處理并在接種當日采集肝臟標本。接種后1月、3月和6月分別各取5只造模成功的實驗組和對照組小鼠肝臟標本，提取RNA；將感染3月小鼠肝臟的小分子RNA標記后與miRNAs微陣列芯片雜交。掃

2、描雜交后的芯片并進行數(shù)據(jù)分析，得到肝泡型包蟲病的miRNAs表達譜。熒光定量 RT-PCR法檢測在1月、3月、6月三個時間點泡球蚴病小鼠肝臟中miR-93、miR-106b、miR-494、miR-152、miR-191和miR-199a的相對表達，預測miR-93和miR-106b的靶基因并初步分析。
　　結果：基因芯片結果顯示，相比對照組，實驗組小鼠肝臟組織中有46個差異表達的miRNAs，29個上調，17個下調；其中上調2倍

3、以上的有19個，下調大于2倍的有2個。熒光定量 RT-PCR驗證結果：miR-93、miR-106b、miR-494、miR-152、miR-191和miR-199a在感染1月實驗組小鼠肝內(nèi)的相對表達量與對照組和正常組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。在感染3月實驗組小鼠肝內(nèi)的相對表達量與對照組和正常組比較均顯著增高（P<0.05）；而miR-494和miR-191在感染6月的相對表達量與對照組和正常組比較顯著增高（P<0.05），