全自動髓過氧化物酶定量檢測方法的建立及其臨床應用研究.pdf

1、急性冠脈綜合征是由冠狀動脈斑塊破裂、血栓形成導致急性或亞急性心肌缺血的臨床綜合癥。炎癥反應伴隨斑塊形成是該綜合癥發(fā)生發(fā)展的主要病理機制。髓過氧化物酶(myeloperoxidase MPO)是一種以血紅素為輔基的蛋白酶,在炎癥發(fā)生時由中性粒細胞釋放入血,因此定量測定血液中髓過氧化物酶含量可一定程度上反映機體炎癥反應的狀態(tài)與嚴重程度,用于輔助診斷急性冠脈綜合癥的發(fā)生與發(fā)展。
　　膠乳增強免疫比濁法,是從免疫凝集實驗發(fā)展而來一種高靈敏

2、度、可用于全自動生化分析儀的簡便快速免疫分析方法,從而使待檢測物質的分子量和含量上突破了原有免疫透射比濁法的局限性。以其高特異性、高靈敏度、線性范圍寬泛和高度自動化被大量應用于臨床檢驗中。
　　本研究通過篩選不同單克隆抗體,經優(yōu)化配對成為檢測抗體對,再根據髓過氧化物酶的含量,選擇不同粒徑的膠乳顆粒,在兼顧線性和靈敏度的條件下,最終確定最優(yōu)膠乳微粒大小203nm。在此基礎上優(yōu)化抗體和膠乳濃度,緩沖液體系,整合配制工藝。確保檢測方法的

3、最優(yōu)化和試劑盒配置工藝的穩(wěn)定性、一致性與可傳承性。
　　按照EP5-A2,EP6-A,EP9-A2等文件,對該方法進行了全面的性能評價,該方法的靈敏度:LoB=1.0ng/ml,LoD=3.9ng/ml,LoQ=4.7ng/ml,批內變異系數(CV):1.25％,批間變異系數(CV):1.85%,平均回收率:100.0%±1.2%,血漿的參考范圍:54-266ng/ml,檢測線性范圍可達20---1300ng/ml,未見明顯內源性

4、干擾物。可實現全自動生化分析儀上使用,操作簡便。
　　利用我們研制的MPO檢測試劑盒,進行臨床試驗。結果MPO水平隨急性冠脈綜合征發(fā)展升高。與常規(guī)的心腦血管檢測指標有一定相關性(P<0.05),且與ACS疾病的進程相關。通過對不穩(wěn)定心絞痛和急性心肌梗死病人檢測制定cut-off值,繪制ROC曲線,不穩(wěn)定心絞痛組,MPO在ROC曲線下的面積,A=0.795,p=0.000,提示MPO診斷UAP準確度為中等;急性心肌梗死組MPO的RO

5、C曲線下面積A=0.911,p=0.000,提示MPO診斷AMI準確度較高。自身免疫性疾病與正常對照組差別無統(tǒng)計學意義(p>0.05),炎癥疾病組MPO水平明顯高于正常對照組(p<0.05)。本法與臨床確診結果進行Kappa檢驗,p=0.000,說明MPO的檢測結果與臨床診斷具有一致性。采用Logistic多元回歸,Wald逐步后退法篩選出MPO,LDH,HCY,IMA和年齡建立預測模型,決定系數(R2=0.922),總正確率為96.8

6、0%,提示使用回歸方程對AMI的預測價值較高。
　　根據國家食品藥品監(jiān)督管理總局有關規(guī)定,完成產品注冊所需所有相關技術資料,并取得產品注冊證。同時完成產品標準品的溯源,確保結果的可溯源性和各不同檢測地之間結果互認。
　　通過以上的研究和實驗證明,膠乳增強免疫比濁法檢測血漿中髓過氧化物酶的檢測方法安全可靠。檢測試劑盒性能優(yōu)越,可以滿足臨床實驗室的需求。臨床試驗結果顯示MPO可以預測急性冠狀動脈綜合征的發(fā)生,同時可以作為ACS的