色素上皮源性因子對淋巴管內(nèi)皮細胞生成的影響.pdf

1、目的:建立穩(wěn)定可行的淋巴管內(nèi)皮細胞的體外培養(yǎng)和鑒定方法。探討色素上皮源性因子(Pigmentepithelitun-derivedfactor，PEDF)對淋巴管內(nèi)皮細胞增殖和游走的影響。旨在尋找安全、實用、有效的淋巴管生成抑制劑。 材料和方法:取健康豬的胸導管內(nèi)皮細胞，進行內(nèi)皮細胞的原代培養(yǎng)。1.淋巴管內(nèi)皮細胞的分離、培養(yǎng)及傳代。2.光鏡、電鏡觀察淋巴管內(nèi)皮細胞的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)特征。3.細胞鑒定實驗：采用免疫細胞化學的方法，應(yīng)

2、用第Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫熒光法和淋巴管內(nèi)皮細胞透明質(zhì)酸受體-1(LYVE-1)抗體對培養(yǎng)的細胞進行聯(lián)合鑒定。4.抑制實驗：采用劃線法和。MTT法觀察色素上皮源性因子對淋巴管內(nèi)皮細胞增殖和遷移的影響。 結(jié)果: 1.光鏡下淋巴管內(nèi)皮細胞呈特征性“鵝卵石狀”或“鋪路石狀”鑲嵌排列，并有接觸抑制現(xiàn)象。 2.透射電鏡可見內(nèi)皮細胞呈卵圓形、多角形或不規(guī)則形，胞核大，胞質(zhì)中含有大量小泡。 3.經(jīng)第Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫熒光鑒

3、定，內(nèi)皮細胞的胞質(zhì)中出現(xiàn)黃綠色顆粒；經(jīng)LYVE-1抗體標記，內(nèi)皮細胞呈綠色，為典型淋巴管內(nèi)皮細胞。 4.劃線法：與對照組相比，當PEDF的濃度≥30ng/ml時，對淋巴管內(nèi)皮細胞的增殖和游走都有明顯的抑制作用(P＜0.01)。5.MTT法：當PEDF的濃度＞25ng/ml時，對內(nèi)皮細胞的增殖具有顯著的抑制作用(P＜0.01)。 結(jié)論： 1.建立了穩(wěn)定可行的淋巴管內(nèi)皮細胞的體外培養(yǎng)方法。 2.采用以第Ⅷ因子