N-乙酰半胱氨酸對糖尿病大鼠腎臟足細胞的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的:
　　足細胞即腎小囊臟層上皮細胞，是一種獨特的、終末分化細胞。足細胞作為腎小球濾過屏障結構的重要組成部分，由于其特殊結構和獨特膜蛋白分子決定了其在腎小球中的重要地位，也決定了其損傷在糖尿病腎病發(fā)生與發(fā)展中扮演重要角色。目前多項研究顯示足細胞數(shù)量和密度、足細胞裂孔隔膜及細胞骨架結構改變、足細胞內(nèi)相關信號分子及信號通路的異常激活均與糖尿病腎病密切相關。本研究通過動態(tài)觀察足細胞的標志性蛋白WT1，足細胞裂孔隔膜的關鍵分子之一nep

2、hrin，由足細胞分泌在糖尿病腎病中發(fā)揮重要作用的VEGF蛋白表達水平，并給予NAC進行干預，探討NAC對于糖尿病大鼠腎臟足細胞的保護機制。
　　方法:
　　1.以Wistar大鼠為實驗動物建立糖尿病模型（一次性STZ尾靜脈注射）。隨機分為正常、糖尿病及干預組，觀察時間為6周和12周。
　　2.檢測腎功能、尿蛋白;光鏡下觀察大鼠腎臟組織病理學改變，通過免疫組化法觀察nephrin、WT1及VEGF蛋白表達水平，通過We

3、stern blot法檢測足細胞裂孔隔膜蛋白nephrin表達水平。
　　3.應用Image-Pro Plus6.0軟件分析免疫組化圖像平均IOD值，應用Image J分析Western blot圖像目標帶光密度值。各組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)。
　　結果:
　　1.成功建立糖尿病大鼠模型。
　　2.與同期對照組相比，糖尿病組及干預組大鼠血糖明顯升高，體重顯著下降，尿量明顯增加。光鏡下可見糖尿病

4、組大鼠腎小球體積增大，部分腎小球萎縮;系膜細胞及系膜基質(zhì)增生，系膜區(qū)明顯增寬，甚至彌漫性系膜硬化;大量腎小管上皮細胞發(fā)生空泡變性，炎性細胞浸潤，以上表現(xiàn)符合糖尿病腎病病理表現(xiàn)。NAC干預組與同期糖尿病組比較，系膜細胞及細胞外基質(zhì)增生減輕，炎性細胞浸潤減少。
　　3.糖尿病組及干預組大鼠腎臟nephrin表達水平顯著低于同期對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與同期糖尿病組相比，干預組nephrin表達水平有所升高，差異有統(tǒng)計

5、學意義(P＜0.05)。免疫組化染色可見，與正常組相比較，同期糖尿病組及干預組棕黃色物質(zhì)顏色變淺，排列方式發(fā)生改變。經(jīng)NAC干預后免疫組化染色顏色有所加深。
　　4.糖尿病組及干預組大鼠腎臟WT1免疫組化染色較同期對照組顏色變淡，平均IOD值明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。經(jīng)NAC干預后WT1免疫組化染色有所加深，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　5.與同期對照組相比，糖尿病組及干預組大鼠腎臟VEGF表達水

6、平明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。糖尿病組及干預組大鼠腎臟VEGF免疫組化染色著色明顯增加。與同期糖尿病組相比，干預組大鼠腎臟VEGF表達水平有所下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，免疫組化染色后可見著色變淡。
　　結論:
　　1.成功建立糖尿病腎病大鼠模型，腎功能異常的同時出現(xiàn)腎組織nephrin、WT1表達減少，VEGF表達增加。
　　2.NAC治療可以減少尿蛋白排泄，具有腎臟保護作用。