siRNA介導(dǎo)的RRM2沉默對(duì)卵巢癌細(xì)胞藥物敏感性的影響.pdf

1、目的:探討小干擾RNA(siRNA)介導(dǎo)的核糖核苷酸小亞基M2（RRM2）沉默對(duì)順鉑(cDDP)誘導(dǎo)的卵巢癌耐藥細(xì)胞株SKOV3/cDDP藥物敏感性的影響。
　　 方法:采用間歇濃度梯度遞增法誘導(dǎo)卵巢癌耐藥細(xì)胞株SKOV3/cDDP，至耐藥系數(shù)達(dá)到3以上方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn);用脂質(zhì)體法分別將RRM2基因的特異性siRNA及非特異性siRNA轉(zhuǎn)染SKOV3/cDDP細(xì)胞，另設(shè)未轉(zhuǎn)染組及轉(zhuǎn)染空脂質(zhì)體組做為對(duì)照;采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR技術(shù)和蛋

2、白印跡法，分別檢測各處理組細(xì)胞中RRM2基因的mRNA和蛋白的表達(dá)情況;用四甲基偶氮唑藍(lán)比色(MTT)法檢測RNAi對(duì)SKOV3/cDDP細(xì)胞藥物敏感性的影響;于轉(zhuǎn)染后24 h分別加入濃度為10μg/ml的吉西他濱(Gemcitabine，Gem)和cDDP，用流式細(xì)胞儀檢測不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞周期及凋亡情況。
　　 結(jié)果:(1)成功誘導(dǎo)出卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株SKOV3/cDDP細(xì)胞，其耐藥系數(shù)達(dá)到3.6，屬低度耐藥，但對(duì)Gem仍

3、敏感;(2) SKOV3/cDDP細(xì)胞中RRM2基因的表達(dá)水平明顯高于SKOV3細(xì)胞(P=0.000);轉(zhuǎn)染后24 h、48 h、72 h、96h，SKOV3/cDDP細(xì)胞RRM2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平均有下調(diào)，其中分別以轉(zhuǎn)染后48 h及72 h下調(diào)水平最為明顯，分別下調(diào)了約74％和92.4％，明顯低于陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組(P＜0.05)。(3)順鉑對(duì)干擾組細(xì)胞的48 h半數(shù)抑制濃度（IC50）值明顯低于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組(P

4、=0.032)。(4)于轉(zhuǎn)染后24 h聯(lián)合半數(shù)致死量的Gem及cDDP作用24 h、48 h、72 h、96h后，卵巢癌細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的凋亡，并且細(xì)胞周期出現(xiàn)G1/S期阻滯，其中以作用72 h的凋亡率最高（96±3.0）％，與干擾組、干擾組分別聯(lián)合吉西他濱、順鉑作用組，在不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞凋亡率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:通過RNAi技術(shù)可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平，增加順鉑耐藥細(xì)胞的藥