白花丹素對術(shù)前PF化療殺傷舌鱗癌細胞凋亡和自噬的影響及作用機制.pdf

1、目的：
　　研究白花丹素（Plumbagin,PB）對術(shù)前PF化療方案殺傷舌鱗癌CAL27細胞凋亡和自噬的影響及作用機制。
　　方法：
　　1、人舌鱗癌CAL27細胞的細胞培養(yǎng)。
　　2、MTT法分別檢測PB、DDP、5-Fu對CAL27細胞的增殖抑制作用及半數(shù)抑制濃度 IC50。
　　3、MTT法檢測PB聯(lián)合PF方案對CAL27細胞的增殖抑制作用。
　　4、流式細胞儀檢測PB和/或PF方案作用于舌鱗

2、癌CAL27細胞后的細胞凋亡率。
　　5、Cyto ID熒光顯微鏡檢測PB和/或PF方案作用于舌鱗癌CAL27細胞后的自噬水平。
　　6、Western Blot法檢測PB和/或PF方案作用于舌鱗癌CAL27細胞后自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3的表達。
　　7、Western Blot法檢測 PB和/或 PF方案作用于舌鱗癌 CAL27細胞后PI3K/AKT/mTOR信號通路蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　

3、　1、PB、DDP、5-Fu分別以濃度依賴方式抑制CAL27細胞增殖，其作用24h的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為7.77μmol/L、10.50μg/ml、1.26mg/ml。
　　2、PB聯(lián)合PF方案作用，與單獨PF方案比較，舌鱗癌CAL27細胞的增殖抑制作用明顯增強。
　　3、PB聯(lián)合PF方案作用，與單獨PF方案比較，舌鱗癌CAL27細胞的凋亡率明顯增強。
　　4、PB聯(lián)合PF方案作用，與單獨PF方案比較，舌鱗癌

4、CAL27細胞的自噬水平明顯增強。
　　5、當PB單獨作用時，CAL27細胞中PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表達不同程度下調(diào)，且PB聯(lián)合PF方案比起單獨應用PF方案，其細胞中PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表達亦不同程度降低。
　　6、應用PI3K/AKT激動劑IGF-1、mTOR激動劑MHY1485作用后，該激動劑逆轉(zhuǎn)了PB對CAL27細胞中PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白的下調(diào)作用，同時顯著抑制PB對