白藜蘆醇對(duì)血管性癡呆的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　血管性癡呆是由一系列腦血管因素導(dǎo)致的腦組織損害引起的以認(rèn)知功能障礙為特征的一種癡呆綜合癥。隨著全世界人口老齡化發(fā)展，血管性癡呆的患病人數(shù)逐年增多，目前在我國(guó)國(guó)內(nèi)血管性癡呆患者在老年癡呆群體中占據(jù)較高份額，其生活質(zhì)量差，家庭負(fù)擔(dān)、社會(huì)負(fù)擔(dān)均較為沉重，因此該病的防治工作不僅受到整個(gè)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的矚目，更引起了整個(gè)社會(huì)的密切關(guān)注，但截至目前，其發(fā)病機(jī)制仍未可知，這方面的研究成為了目前研究的熱點(diǎn)。白藜蘆醇是從中國(guó)傳統(tǒng)中藥虎杖根

2、莖中被提取的天然化學(xué)物質(zhì)。其是具有抗氧化活性的天然物質(zhì)，生物活性廣泛，在調(diào)節(jié)血脂、止咳平喘、抗氧化、抗腫瘤進(jìn)展、對(duì)抗細(xì)菌上均發(fā)揮重要作用，此外其還可以對(duì)肝臟及心血管系統(tǒng)形成保護(hù)作用，備受神經(jīng)系統(tǒng)及心腦疾病領(lǐng)域的關(guān)注。目前對(duì)于白藜蘆醇血管和神經(jīng)保護(hù)作用的研究，成為神經(jīng)科一個(gè)新的熱點(diǎn)，但目前對(duì)白藜蘆醇的研究多集中在神經(jīng)系統(tǒng)變性性疾病及急性腦血管病方面，在癡呆方面主要著重于在阿爾茨海默病方面的研究。對(duì)于血管性癡呆方面的研究尚不是很多。另外如前

3、所述白藜蘆醇是一種天然的抗氧化劑，其抗氧化應(yīng)激的作用得到了眾多學(xué)者的認(rèn)可，但其在抗凋亡及膽堿能系統(tǒng)是否同樣發(fā)揮一定的保護(hù)作用，還不得而知。所以在本研究中，擬通過(guò)不同的方面探討白藜蘆醇對(duì)血管性癡呆的血管及神經(jīng)保護(hù)作用。該研究共包括以下四部分內(nèi)容:
　　第一部分白藜蘆醇預(yù)處理對(duì)PC12細(xì)胞氧糖剝奪損傷模型氧化應(yīng)激的影響
　　目的:
　　通過(guò)對(duì)PC12細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，剝奪氧糖建立相應(yīng)的損傷模型，就白藜蘆醇預(yù)處理后的細(xì)胞活力

4、、乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶、丙二醛的影響，從而通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討白藜蘆醇對(duì)血管性癡呆的保護(hù)作用。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞，不同濃度(10μmol/L、20 mol/L、40μmol/L、60μmol/L)白藜蘆醇預(yù)處理PC12細(xì)胞24小時(shí)后，應(yīng)用化學(xué)方法建立細(xì)胞氧糖剝奪損傷模型。復(fù)氧24小時(shí)后，通過(guò)四甲基偶氮哇藍(lán)法觀察不同濃度白藜蘆醇對(duì)細(xì)胞活力的影響;同時(shí)檢測(cè)乳酸脫氫酶活性，超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。

5、r>　　結(jié)果:
　　模型組較對(duì)照組的PC12細(xì)胞活力明顯下降(P＜0.05)，10μmol/L、20μmol/L白藜蘆醇組可明顯升高PC12細(xì)胞細(xì)胞活力(P＜0.05)，且兩組之間存在顯著性差異(P＜0.05);而40μmol/L組與模型組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，而60μmol/L組與模型組相比細(xì)胞活力有所下降(P＜0.05)。與對(duì)照組相比，模型組LDH的釋放量顯著增加(P＜0.05)，與模型組相比，10μmol/L、2

6、0μmol/L白藜蘆醇組LDH的釋放量均有所減少(P＜0.05)，且兩組之間存在顯著性差異(P＜0.05)，40μmol/L白藜蘆醇組與模型組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，60μmol/L白藜蘆醇組與模型組相比LDH釋放量增加，存在顯著性差異(P＜0.05)。與正常對(duì)照組相比，模型組SOD活性顯著下降(P＜0.05)，與模型組相比，10μmol/L、20μmol/L白藜蘆醇組SOD活性均有所升高(P＜0.05)，且兩組之間存在顯著性

7、差異（P＜0.05），40μmol/L白藜蘆醇組與模型組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，60μmol/L白藜蘆醇組與模型組相比SOD活性有所下降，存在顯著性差異(P＜0.05)。與正常對(duì)照組相比，模型組MDA水平顯著升高(P＜0.05)，與模型組相比，10μmol/L、20μmol/L白藜蘆醇組MDA活性均有所下降(P＜0.05)，且兩組之間存在顯著性差異(P＜0.05);40μmol/L白藜蘆醇組與模型組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.0

8、5)，60μmol/L白藜蘆醇組與模型組相比MDA水平有所升高，存在顯著性差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　10μmol/L、20μmol/L白藜蘆醇預(yù)處理可以提高PC12細(xì)胞氧糖剝奪損傷模型的細(xì)胞活力，且具有一定的濃度依賴性，而40μmol/L白藜蘆醇對(duì)該模型細(xì)胞活力無(wú)明顯影響，60μmol/L白藜蘆醇可以降低該模型細(xì)胞活力;其具體保護(hù)機(jī)制可能與減少LDH釋放、升高SOD活性、降低MDA活性相關(guān)。
　　第二部分

9、白藜蘆醇對(duì)血管性癡呆大鼠模型行為學(xué)的影響
　　目的:
　　采用持久雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)造成血管性癡呆大鼠模型，觀察白藜蘆醇對(duì)血管性癡呆大鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力的影響。
　　方法:
　　選取健康Wistar大鼠（月齡為12～14月），體重300～400g，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、白藜蘆醇對(duì)照組及白藜蘆醇治療組，采用持久雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)造成血管性癡呆大鼠模型，白藜蘆醇對(duì)照組及白藜蘆醇治療組于術(shù)后8周開(kāi)始以白藜蘆醇（25m

10、g.kg-1）每天灌胃，對(duì)照組和模型組以同等量的0.5 g/L羧甲基纖維素鈉灌胃，連續(xù)4周。采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)定位航行實(shí)驗(yàn)和空間搜索實(shí)驗(yàn)衡量大鼠學(xué)習(xí)記憶水平。
　　結(jié)果:
　　訓(xùn)練第1～3天，模型組動(dòng)物的平均上臺(tái)潛伏期以及上臺(tái)前游泳距離與其他組無(wú)明顯差別;而且隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，到達(dá)平臺(tái)的潛伏期及游泳距離不斷縮短。但到第4天，模型組大鼠的上臺(tái)潛伏期和游泳距離明顯高于對(duì)照組和白藜蘆醇治療組(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)第5天撤

11、除平臺(tái)，模型組動(dòng)物在平臺(tái)所在象限（第Ⅱ象限）中游泳的時(shí)間百分比和距離百分比明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)和白藜蘆醇治療組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　白藜蘆醇可以提高血管性癡呆大鼠模型的學(xué)習(xí)記憶能力。驗(yàn);空間搜索實(shí)驗(yàn)
　　第三部分白藜蘆醇對(duì)VD大鼠模型氧化應(yīng)激及膽堿能系統(tǒng)的影響
　　目的:
　　我們擬觀察白藜蘆醇對(duì)血管性癡呆大鼠模型海馬和皮層組織丙二醛、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽，以及乙酰膽堿酯酶、膽堿

12、乙酰轉(zhuǎn)移酶的影響。
　　方法:
　　第二部分動(dòng)物模型在完成行為學(xué)檢測(cè)后，斷頭取腦，在冰盒上剝離皮層與海馬組織，測(cè)定各組大鼠腦皮層、海馬組織丙二醛、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽活性的變化;及乙酰膽堿酯酶、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的變化。
　　結(jié)果:
　　與對(duì)照組相比，模型組大鼠腦皮層、海馬組織內(nèi)丙二醛的活性明顯升高(P＜0.05)、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽的活性明顯降低(P＜0.05);與模型組相比，白藜蘆醇治療組大鼠腦皮層

13、、海馬組織內(nèi)丙二醛的活性明顯降低(P＜0.05)、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽的活性明顯升高(P＜0.05)。與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠腦皮層、海馬組織內(nèi)乙膽堿酯酶活性明顯升高(P＜0.05)、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶活性明顯降低(P＜0.05);與模型組相比，白藜蘆醇治療組大鼠腦皮層、海馬組織內(nèi)乙膽堿酯酶明顯減低（P＜0.05），膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶活性明顯升高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　白藜蘆醇可以抑制血管性癡呆大鼠模型的氧化應(yīng)激

14、反應(yīng);白藜蘆醇可以刺激血管性癡呆大鼠模型的膽堿能系統(tǒng)。
　　第四部分白藜蘆醇對(duì)血管性癡呆大鼠模型凋亡的影響
　　目的:
　　我們擬觀察白藜蘆醇對(duì)血管性癡呆大鼠模型凋亡相關(guān)蛋白的影響，從而探討白藜蘆醇對(duì)血管性癡呆的保護(hù)機(jī)制。
　　方法:
　　第二部分動(dòng)物模型在完成行為學(xué)檢測(cè)后，斷頭取腦，在冰盒上剝離皮層與海馬組織，采取Westen-blot的方法檢測(cè)Bax、Bcl-2、Caspase-3、PARP表達(dá)的影響。

15、
　　結(jié)果:
　　與正常組相比，模型組的Bax的表達(dá)明顯上升，而B(niǎo)cl-2的表達(dá)明顯下降，Bax/Bcl-2的比率也明顯升高(P＜0.05)。與模型組相比，白藜蘆醇組Bax的表達(dá)明顯下降，而B(niǎo)cl-2的表達(dá)明顯上升，Bax/Bcl-2的表達(dá)明顯下降(P＜0.05)。與正常組相比，模型組的caspase-3的表達(dá)明顯上升(P＜0.05)。與模型組相比，白藜蘆醇組caspase-3的表達(dá)明顯下降(P＜0.05)。與正常組相比，模